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主營(yíng)產(chǎn)品： 硫酸諾爾斯菌素,D-熒光素,雷帕霉素 |
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更新時(shí)間：2024-04-07 16:08:56瀏覽次數(shù)：1870
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DH5α Electrocompetent cell
大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品標(biāo)簽：
DH5α Electrocompetent Cell 電擊感受態(tài)細(xì)胞；*0；DH10B；XL1-Blue；1mm電轉(zhuǎn)杯（電擊杯）；Biorad 1652083；
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MF2381-0250UL | DH5α Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 5×50μl | 540 |
MF2381-1000UL | DH5α Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 20×50μl | 1730 |
菌株描述
DH5α是實(shí)驗(yàn)室常用的一種質(zhì)?？寺∮镁?，其φ80lacZ△M15基因的產(chǎn)物可與載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。特別適用于高效的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。
DH5α菌株基因型： F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA
產(chǎn)品描述
本品是大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的電擊感受態(tài)細(xì)胞，只能用于DNA的電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×1010 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
產(chǎn)品包裝
組分編號(hào) | 組分名稱 | 貨號(hào)（規(guī)格） | |
MF2381-0250UL | MF2381-1000UL | ||
MF2381-A | DH5α Electrocompetent cell | 5×50μl | 20×50μl |
MF2381-B | Control Plasmid puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
保存與運(yùn)輸條件：
保存：-80℃保存，六個(gè)月有效。
運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。
注意事項(xiàng)
1） 感受態(tài)細(xì)胞要保存在-80℃以下，不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
整個(gè)轉(zhuǎn)化操作，嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件要求進(jìn)行。
加入DNA的體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。DNA不純或存在鹽、乙醇、蛋白及緩沖液等污染時(shí)，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。
為確保高轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫。
5） 電擊感受態(tài)細(xì)胞加入電擊杯應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會(huì)增加弧光放電風(fēng)險(xiǎn)。
6） 電擊杯里的離子可增加溶液的電導(dǎo)，增大在含有細(xì)胞和DNA的溶液中產(chǎn)生電流和弧光放電的風(fēng)險(xiǎn)。
7） 若轉(zhuǎn)化大質(zhì)粒或想獲得較高轉(zhuǎn)化效率，推薦使用高純質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
8） 對(duì)于連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化：要在轉(zhuǎn)化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液重懸產(chǎn)物，保證DNA濃度不超過(guò)100ng/μl。過(guò)高濃度連接產(chǎn)物或過(guò)大體積連接產(chǎn)物會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率，增加弧光放電的風(fēng)險(xiǎn)。
9） 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作，吸取感受態(tài)細(xì)胞時(shí)不可用孔徑過(guò)小的槍頭（普通200μl槍頭應(yīng)剪去槍頭尖0.6cm）。避免用力過(guò)猛，以免剪切力過(guò)大損傷細(xì)胞膜，降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。
10） 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】
1）將0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發(fā)干凈，立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。
2）取-80℃保存的電擊感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5min，待其*融化。加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），用手拍打管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。
【注意】：①若需要測(cè)定轉(zhuǎn)化效率，使用1μl 對(duì)照質(zhì)粒 pUC19（10 pg/μl）；②對(duì)于連接產(chǎn)物，請(qǐng)用乙醇沉淀DNA后加入適量TE buffer（貨號(hào)：MS3537-500ML）重懸，DNA濃度不要超過(guò)100ng/μl，體積不超過(guò)5μl/50μl感受態(tài)。
3）用200μl槍頭將感受態(tài)-DNA混合物快速移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。
4）啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=1800 V（此參數(shù)參考Bio-rad，具體使用請(qǐng)參考電轉(zhuǎn)儀推薦步驟來(lái)操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中。
5）2min后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入700μl不含抗生素的無(wú)菌SOC培養(yǎng)基（室溫），用1ml槍吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后，轉(zhuǎn)移到50ml離心管（比如：BD Falcon 50ml錐形離心管），向離心管中補(bǔ)加SOC培養(yǎng)基至5ml。37℃，225 rpm復(fù)蘇60min。
6) 5000rpm，1min離心收菌，重懸后取100-200μl涂布到含相應(yīng)抗生素的SOC平板上（因菌量較大，若全部
涂板請(qǐng)選用直徑15cm培養(yǎng)皿2-5個(gè)）。將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)13-17h。
相關(guān)產(chǎn)品
貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
MF2381-0250UL | DH5α Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 5×50μl |
MF2382-0250UL | *0 Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 5×50μl |
MF2383-0250UL | DH10B Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 5×50μl |
MF2384-0250UL | TG1 Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 5×50μl |
MF2385-0250UL | BJ5183 Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 5×50μl |
MF2386-0250UL | BJ5183-AD-1 Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 5×50μl |
MF2387-0250UL | XL1-Blue Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 5×50μl |
MF2388-0250UL | SURE Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 | 5×50μl |
MS0018-10G | Ampicillin, Sodium Salt 氨芐青霉素鈉 | 10g |
MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt 羧芐青霉素二鈉鹽 | 5g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade 利福平 | 1g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠(chéng)為信、合同守信"的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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