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DiI (DiIC₁₈(3)) 細(xì)胞膜橙紅色熒光探/神經(jīng)元示蹤研究

溫馨提示：見細(xì)胞膜熒光探針專題，選擇你想要的適膜標(biāo)記探針。

搜索關(guān)鍵詞：

細(xì)胞膜熒光探針，DiI，DiO，DiD，DiR，DiA，CM-DiI，神經(jīng)示蹤，傳統(tǒng)細(xì)胞膜熒光探針

訂購信息：

產(chǎn)品描述：

DiI, DiO, DiD和DiR作為一類長鏈的親脂性二烷基碳菁類染料（Dialkylcarbocyanines）熒光染料家族，用于標(biāo)記細(xì)胞膜以及其他脂溶性生物結(jié)構(gòu)。作為一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強度很弱）結(jié)合時，其熒光強度顯著增強。一旦進入細(xì)胞后，它們在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴散，于家濃度條件下可將整個細(xì)胞均勻染色。這些染料具很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。

四種染料呈現(xiàn)不同的熒光顏色，DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC濾光器檢測，可結(jié)合使用。其中，DiI及其衍生物由于極其低的細(xì)胞毒性，應(yīng)用為廣泛。不僅普遍用于活體和固定組織及細(xì)胞的神經(jīng)元逆行性和順行性示蹤分析，還可以用于檢測細(xì)胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程的細(xì)胞遷移，通過FRAP（熒光光漂白恢復(fù)技術(shù)）檢測脂質(zhì)在細(xì)胞膜上的擴散過程，檢測細(xì)胞毒性，以及標(biāo)記脂蛋白如LDL和HDL等。

本品以DiI的高氯酸鹽形式提供，英文全名：1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate，CAS NO.41085-99-8，純度≥98%（TLC），適用于熒光檢測研究。

基本特性：

1）同義名：DiI perchlorate; DiIC18(3); 1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate;

2）CAS NO：41085-99-8

3）分子式：C59H97ClN2O4

4）分子量：933.87g/mol

5）純度：≥98%（TLC）

6）溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇

7）外觀：紅色至暗紅色，紫色至深紫色粉末

8）Ex/Em：550/567 nm（inphosphate buffer/SDS pH 7.0）

9）推薦濾光器：Omega-XF108, XF32, Chroma-41002, 31002

10）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

注意事項

1）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據(jù)具體的實驗條件做出調(diào)整。

1. 染色液制備

1）儲存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取5mg DiI（Mw：933.87g/mol）溶于1.07ml無水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲存液?！咀⒁狻课词褂玫膬Υ嬉悍盅b儲存在-20℃，避免反復(fù)凍融。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調(diào)整到1～5 μM的工作濃度。【注意】工作液終濃度需要根據(jù)不同細(xì)胞系和實驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度開始，以10倍范圍為區(qū)間進行有濃度的摸索。

2. 懸浮細(xì)胞染色

1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×106/mL。

2）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞家培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

5）再重復(fù)3），4）步驟兩次。

3. 貼壁細(xì)胞染色

4. 顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見下表：

5. 流式細(xì)胞儀檢測

經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細(xì)胞分別用流式細(xì)胞儀的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3或FL4通道檢測。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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