SABC（Strept Actividin-Biotin Complex）法是一種顯示組織和細(xì)胞中抗原分布的簡(jiǎn)便而敏感的免疫組化染色方法。由于該方法中的鏈霉親和素的等電點(diǎn)接近中性（pH=6.0-6.5），對(duì)組織和細(xì)胞的吸附性特別低，因而具有較低的背景。它的步驟與其他免疫組化染色基本相似，有良好的可操作性。

盡管SABC法操作簡(jiǎn)便，敏感性強(qiáng)，但是，在操作中仍然要遵循一定的原則，才能得到可信度高的結(jié)果。elisa試劑盒

下面就按照實(shí)驗(yàn)步驟，談一下我的一些體會(huì)。

1、載玻片防脫片劑處理：應(yīng)用多聚賴氨酸涂片時(shí)，應(yīng)使用塑料容器稀釋多聚賴氨酸，防止多聚賴氨酸過(guò)多吸附于容器上，在染色時(shí)出現(xiàn)脫片現(xiàn)象。

2、切片常規(guī)脫蠟至水：二甲苯雖然可以反復(fù)使用，但次數(shù)不宜多。乙醇的濃度是從高到低，與脫水時(shí)相反。

3、滅活內(nèi)源性酶：博士德推薦應(yīng)用3%的雙氧水，但實(shí)際操作中，使用30%雙氧水和純甲醇按1:9的溶劑比混合較為理想。

4、抗原修復(fù)：由于β1-integrin在細(xì)胞膜上表達(dá)，因此沒有必要進(jìn)行熱修復(fù)抗原或者微波修復(fù)抗原，只用到了抗原修復(fù)液。

5、正常山羊血清封閉：封閉時(shí)應(yīng)該注意室溫與時(shí)間的相對(duì)關(guān)系。室溫低，時(shí)間就要長(zhǎng)一些，反之亦然。另外，保持反應(yīng)池濕潤(rùn)是重要的一環(huán)，否則，前功盡棄。后面的步驟也是如此。elisa試劑盒

6、一抗（抗β1-integrin）反應(yīng)：一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度與背景有直接關(guān)系。一般說(shuō)來(lái)，陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí)，可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間；背景過(guò)高時(shí)則相反。

一抗的濃度：這需要自行探索，雖然試劑公司給出了參考濃度，但仍然要探索出恰當(dāng)?shù)臐舛?，任何取巧的念頭都是在自討苦吃。

孵育時(shí)間與溫度：抗原抗體充分反應(yīng)是得到可靠結(jié)果的關(guān)鍵。因此，控制溫度與時(shí)間也是一個(gè)嚴(yán)肅的問(wèn)題。由于室溫控制較為困難，建議4℃冰箱過(guò)夜（≥18h）。

7、二抗（生物素化山羊抗兔IgG）反應(yīng)：觀察發(fā)現(xiàn)，37℃條件下二抗反應(yīng)20分鐘，盡管反應(yīng)池保持濕潤(rùn)，但在排除了其他因素后，仍然得不到陽(yáng)性結(jié)果。原因在于，二抗沒有與其他溶液混勻而聚集在反應(yīng)池四周，在37℃孵育20分鐘甚至更長(zhǎng)的時(shí)間后，二抗干燥，根本沒有充分反應(yīng)。解決的方法是：二抗的量要相對(duì)多些，同時(shí)要混勻；隨時(shí)觀察反應(yīng)池的情況。

另外一種原因，就是儀器顯示溫度37℃，但實(shí)際只有23℃，自然結(jié)果難以令人滿意。因此，查找原因時(shí)，不應(yīng)被表面現(xiàn)象迷惑，應(yīng)該認(rèn)真地落實(shí)每一步，才能找到解決辦法。

8、SABC染色（37℃）：這是博士德的人性化之處，直接就可以用。

9、DAB顯色鏡下控時(shí)：DAB濃度應(yīng)該比推薦的要低一些，這樣可以便于控制反應(yīng)時(shí)間以及在合適的時(shí)候中止反應(yīng)。

同時(shí)注意，使用后殘余的DAB應(yīng)妥善處理，而不是隨便倒入下水道，因?yàn)樗赡苡兄掳┬浴?br />
10、蘇木素輕度復(fù)染：不建議使用。盡管復(fù)染后標(biāo)本層次分明，但實(shí)際情況是，這樣有時(shí)也會(huì)掩蓋陽(yáng)性結(jié)果，從而使前功盡棄。elisa試劑盒
11、脫水透明：脫水乙醇的濃度由低到高，有一個(gè)較準(zhǔn)確判斷脫水成功與否的辦法是：觀察透明后盛二甲苯容器的壁，若發(fā)現(xiàn)白色霧狀現(xiàn)象，則說(shuō)明脫水不成功，應(yīng)再次脫水。透明時(shí)間不要太長(zhǎng)，1分鐘左右就可以了。

12、封片：封片時(shí)，中性樹脂量宜少，同時(shí)注意不要產(chǎn)生氣泡。