人肺細(xì)胞HLF-a細(xì)胞株
(一)細(xì)胞培養(yǎng)在臨床病原學(xué)診斷中應(yīng)用
臨床上多種病原生物如病毒、立克次體、衣原體、胞內(nèi)寄生的細(xì)菌、原蟲等的分離培養(yǎng)和藥物敏感試驗(yàn)是通過細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)完成的,如人免疫缺陷病毒(HIV)和新近出現(xiàn)的嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)病毒等就是通過細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)的。臨床應(yīng)用微量全血培養(yǎng)技術(shù)診斷HIV的感染,已用于兒童HIV垂直感染的早期診斷及可疑感染者的確認(rèn)。
1. 病毒的分離的常用細(xì)胞
對病毒性疾病的病原學(xué)診斷,zui可靠的方法是從標(biāo)本中分離并鑒定出致病性病毒。由于病毒具有嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生性,對病毒的分離培養(yǎng)必須選用敏感的細(xì)胞,包括動(dòng)物、雞胚和細(xì)胞培養(yǎng)。目前zui被廣泛采用的方法就是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。用于病毒分離的細(xì)胞種類很多,由于不同種類病毒對細(xì)胞的敏感性不同,因此首先應(yīng)根據(jù)病毒的種類選擇敏感細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)。細(xì)胞的種類按其來源、染色體特征及傳代次數(shù)等可分為原代細(xì)胞、二倍體細(xì)胞及傳代細(xì)胞3種類型。但由于原代細(xì)胞只能傳1~3代,器官來源、操作繁鎖等問題使該方法應(yīng)用受限,而二倍體細(xì)胞和傳代細(xì)胞,由于可以長期傳代、培養(yǎng)方便,故較為常用。
2. 體外抗病藥效試驗(yàn)
抗病藥效測試驗(yàn)分為體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)。體外試驗(yàn)是采用組織細(xì)胞培養(yǎng)法來觀察藥物的抗病毒作用。在實(shí)驗(yàn)中要根據(jù)藥物的特性來選擇病毒;根據(jù)病毒對細(xì)胞易感性選擇所用細(xì)胞;觀察藥效指標(biāo)常采用病毒致細(xì)胞病變(CPE)情況來判定藥物的抗病毒效果。下面以抗呼吸道病藥物為例采用微量細(xì)胞培養(yǎng)法介紹藥物體外抑病毒試驗(yàn)方法。
(二) 細(xì)胞培養(yǎng)在臨床腫瘤診斷中的應(yīng)用
1.腫瘤細(xì)胞端粒與端粒酶活性檢測
真核細(xì)胞染色體末端含有串連重復(fù)的DNA序列,稱為特殊的DNA一蛋白質(zhì)端粒結(jié)構(gòu)。當(dāng)正常體細(xì)胞分裂時(shí),端粒的末端均會(huì)隨每次的復(fù)制被逐漸縮短,端粒的定長可能與正常細(xì)胞的有限分裂代數(shù)(約50代左右)有關(guān),待端粒結(jié)構(gòu)縮短至zui后時(shí),細(xì)胞即不再能分裂,這從整體上也限制了機(jī)體壽命的長短。原核細(xì)胞、真核細(xì)胞中的某些種系,很多腫瘤細(xì)胞等獲得了不死性,說明它們具有延長端粒的性能,能將新生的重復(fù)序列加到染色體的末端,這就是端粒酶(omerase)的作用。人的正常體細(xì)胞無端粒酶活性,這些酶的重新活化可能使細(xì)胞獲得了無限分裂的能力,故端粒酶的活性檢測,可被作為惡性腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移的潛在標(biāo)記。
2.腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞凋亡
細(xì)胞凋亡是細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下,遵循自身的程序去結(jié)束生命的過程。這是保證多細(xì)胞生物個(gè)體正常發(fā)育、成熟和維持生理過程所必需的?,F(xiàn)已知,細(xì)胞凋亡作為一種細(xì)胞內(nèi)源性基因調(diào)控下的生理性死亡方式,此過程如發(fā)生障礙,不僅能成為腫瘤發(fā)生的主要機(jī)制之一,而且也與腫瘤的治療和耐藥性的形成密切相關(guān)。目前認(rèn)為多種化學(xué)結(jié)構(gòu)不同、作用機(jī)制各異的抗腫瘤藥物,均可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞逆轉(zhuǎn)出現(xiàn)凋亡。因此,掌握細(xì)胞凋亡的檢測方法,不僅可篩選抗腫瘤藥物,而且可用以研究腫瘤的發(fā)生及消亡機(jī)制。
3.腫瘤細(xì)胞體外藥物敏感性檢測
化學(xué)療法是治療惡性腫瘤的主要手段之一,但臨床醫(yī)師普遍存在著盲目用抗癌藥的情況。為提供合理用藥的科學(xué)依據(jù),利用來源于手術(shù)切除或活檢組織中分離的腫瘤細(xì)胞,進(jìn)行抗癌藥物敏感性測定,可為臨床醫(yī)生合理選擇有效藥物提供參考,現(xiàn)介紹幾種常用的方法。
人肺細(xì)胞HLF-a細(xì)胞株
人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5
人胚肺成纖維細(xì)胞CCC-HPF-1
人胚胎氣管組織來源細(xì)胞CCC-HBE-2
人胚胎肺成纖維細(xì)胞WI-38
SV-40Z轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞WI38/VA13
人胚肺二倍體細(xì)胞2BS
人胚肺二倍體細(xì)胞KMB-17
人肺細(xì)胞HLF-a
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞DMS 153
人胚肺細(xì)胞 VA13細(xì)胞WI-38 VA13亞系 2RA
人胚肺二倍體細(xì)胞HEL-1
人胚肺細(xì)胞系KuMA
人肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞系A(chǔ)E1201
人肺鱗癌細(xì)胞NCI-H226
人胚肺二倍體細(xì)胞HEL-2
人支氣管上皮樣細(xì)胞BEAS-2B
人胚肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞SL-1
人肺腺癌細(xì)胞Calu-3
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H209
人低分化肺腺癌細(xì)胞GLC-82
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H446
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞NCI-H157
人肺鱗癌細(xì)胞NCI-H520
人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株P(guān)G-BE1
人肺巨細(xì)胞癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株P(guān)G-LH7
人肺癌細(xì)胞A-427
人低分化肺腺癌細(xì)胞SK-LU-1
人肺支氣管癌細(xì)胞NCI-H1650
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞NCI-H1975
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞NCI-H2087
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H2227
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H23
人肺腺鱗癌細(xì)胞NCI-H596
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H838
人肺鱗癌細(xì)胞LTEP-s
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞LTEP-sm
人肺鱗癌瘤株LTEP-s
人肺鱗癌細(xì)胞NCI-H1703
人肺鱗癌細(xì)胞NCI-H2170
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H524
人肺腺癌細(xì)胞SPC-A1
人肺癌細(xì)胞A549
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞H125
人肺癌細(xì)胞H1299
人肺癌細(xì)胞TKB-1
人肺腺癌細(xì)胞LTEP-a-2
(三)細(xì)胞培養(yǎng)在臨床病因診斷中的應(yīng)用
由于對造血干細(xì)胞的研究取得成功,故臨床上利用造血細(xì)胞培養(yǎng)作為造血干細(xì)胞克隆性疾病的診斷和療效分析的常用方法。造血干細(xì)胞約占細(xì)胞總數(shù)的0.4%,可向多種定向祖細(xì)胞分化增殖,所以不同類型的造血干細(xì)胞克隆性疾病,如骨髓增生異常綜合征(MDS)、急、慢性白血?。ˋML、CML)、再生障礙性貧血(AA)、骨髓增生性疾病等,其造血細(xì)胞的集落分析均有一定特點(diǎn),如重癥再生障礙性貧血患者的骨髓、外周血培養(yǎng)幾乎都無集落形成,可能與混合集落形成細(xì)胞(cfu-MIX)培養(yǎng)階段發(fā)生障礙有關(guān)。另一項(xiàng)專門技術(shù)是用來診斷與染色體變化相關(guān)的疾病,如判定和發(fā)現(xiàn)染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目異常的綜合征。取自骨髓、外周血、絨毛膜、羊水中胎兒脫落細(xì)胞和臍血、皮膚等各種組織,使這些細(xì)胞在一定條件下培養(yǎng),使之大部分細(xì)胞處于有絲分裂并停止在分裂中期相,進(jìn)一步使細(xì)胞核體積脹大,以利于進(jìn)行染色體分析。染色體分析是產(chǎn)前診斷的主要內(nèi)容之一,此外臨床上更多的是用于細(xì)胞遺傳學(xué)診斷并成為臨床診斷白血病、判斷預(yù)后和觀察治療效果的重要方法學(xué)。(見產(chǎn)前診斷、遺傳病實(shí)驗(yàn)診斷等相關(guān)章節(jié))。
人肺細(xì)胞HLF-a細(xì)胞株
(四)在臨床實(shí)驗(yàn)診斷中對細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用的評價(jià)
1.培養(yǎng)技術(shù)繁雜,需具備一定的實(shí)驗(yàn)條件才能開展。
2.細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在某些方面的應(yīng)用是不可替代的。如分離培養(yǎng)病毒等細(xì)胞內(nèi)寄生的病原體。
3.細(xì)胞在體外培養(yǎng),由于環(huán)境及條件的局限性,應(yīng)避免將體外培養(yǎng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果機(jī)械地看作體內(nèi)同種細(xì)胞性狀的必然反映。如體外篩選的抗病藥物或抗腫瘤藥物,在體外有效不等于在體內(nèi)就一定有效。
4.細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的臨床應(yīng)用方興未艾,地、市級以上的醫(yī)院里應(yīng)積極創(chuàng)造條件建立細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室,開展對病毒、腫瘤等實(shí)驗(yàn)診斷工作,以體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果輔助體內(nèi)的各項(xiàng)檢查。
5.細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)、信息學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)等結(jié)合,在細(xì)胞水平與分子水平之間互動(dòng),在研究生命活動(dòng)規(guī)律和診斷疾病方面將發(fā)揮更大的作用。