人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5細(xì)胞株
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解和掌握動(dòng)物染色體涂片標(biāo)本的制作過程。
二、實(shí)驗(yàn)原理
三、實(shí)驗(yàn)材料 青蛙或蟾蜍
四、實(shí)驗(yàn)器具和藥品試劑 冰箱、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、顯微鏡、分析天平、藥物天平、臺(tái)稱、試管架、離心管、吸管、燒杯、量筒、注射器(1ml、5ml)、5號(hào)針頭、載玻片、解剖盤、解剖刀、剪刀、鑷子、酒精燈、切片盒、切片架、紗布、黑白膠卷。 0.1％秋水仙素溶液、0.046M KCL 溶液、1％檸檬酸鈉溶液、甲醇、冰醋酸、磷酸緩沖液、Giemsa原液、沖洗底片的藥液。
五、實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一) 前處理 用臺(tái)稱稱量青蛙或蟾蜍的體重，然后按10微克／克動(dòng)物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時(shí)后，將動(dòng)物處死，用剪刀剪開皮膚和肌肉，取出大腿骨和脛骨，剔凈股骨上的肌肉，然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨，用注射器（內(nèi)裝5ml 1％ 檸檬酸鈉溶液）緩慢沖洗骨髓細(xì)胞到離心管中，經(jīng)平衡后離心8分鐘，速度為1000轉(zhuǎn)／分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液，留沉淀物0.2ml，加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度，用吸管沖勻沉淀物，在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長一點(diǎn)時(shí)間。
(四) 固定 低滲后，以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液，留0.2ml沉淀物，沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1～2次，離心的速度與時(shí)間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加4滴新配的固定液，沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片，每片滴3滴細(xì)胞懸液，立即用嘴向載片上吹氣，使細(xì)胞均勻分散，在酒精燈火焰上來回烤一下，以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10：1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH＝6.8磷酸緩沖液稀釋)，然后用水沖洗，片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相，轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細(xì)觀察兩棲類染色體的數(shù)目，屬于大、中、小染色體各有多少條。
人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5細(xì)胞株 細(xì)胞索引：
人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5
人胚肺成纖維細(xì)胞CCC-HPF-1
人胚胎氣管組織來源細(xì)胞CCC-HBE-2
人胚胎肺成纖維細(xì)胞WI-38
SV-40Z轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞WI38/VA13
人胚肺二倍體細(xì)胞2BS
人胚肺二倍體細(xì)胞KMB-17
人肺細(xì)胞HLF-a
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞DMS 153
人胚肺細(xì)胞 VA13細(xì)胞WI-38 VA13亞系 2RA
人胚肺二倍體細(xì)胞HEL-1
人胚肺細(xì)胞系KuMA
人肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞系A(chǔ)E1201
人肺鱗癌細(xì)胞NCI-H226
人胚肺二倍體細(xì)胞HEL-2
人支氣管上皮樣細(xì)胞BEAS-2B
人胚肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞SL-1
人肺腺癌細(xì)胞Calu-3
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H209
人低分化肺腺癌細(xì)胞GLC-82
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H446
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞NCI-H157
人肺鱗癌細(xì)胞NCI-H520
人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株P(guān)G-BE1
人肺巨細(xì)胞癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株P(guān)G-LH7
人肺癌細(xì)胞A-427
人低分化肺腺癌細(xì)胞SK-LU-1
人肺支氣管癌細(xì)胞NCI-H1650
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞NCI-H1975
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞NCI-H2087
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H2227
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H23
人肺腺鱗癌細(xì)胞NCI-H596
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H838
人肺鱗癌細(xì)胞LTEP-s
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞LTEP-sm
人肺鱗癌瘤株LTEP-s
人肺鱗癌細(xì)胞NCI-H1703
人肺鱗癌細(xì)胞NCI-H2170
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H524
人肺腺癌細(xì)胞SPC-A1
人肺癌細(xì)胞A549
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞H125
人肺癌細(xì)胞H1299
人肺癌細(xì)胞TKB-1
人肺腺癌細(xì)胞LTEP-a-2
人肺腺癌細(xì)胞Lu-165
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H460
人肺腺癌細(xì)胞SPC-A-1
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞095-D
人肺鱗癌細(xì)胞SK-MES-1
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H661
人肺黏液上皮樣癌細(xì)胞NCI-H292
人肺退行性癌細(xì)胞Calu-6
人肺腺癌細(xì)胞NCI-H1395
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H358
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞HCC827
人典型小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H1688
人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5細(xì)胞株
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;
通過實(shí)驗(yàn)，掌握空氣干燥法制片技術(shù)。
二、實(shí)驗(yàn)原理
在骨髓細(xì)胞中，有絲分裂的指數(shù)是相當(dāng)高的，因此可以直接得到中期細(xì)胞而不必像血淋巴細(xì)胞那樣要經(jīng)過體外培養(yǎng)。通過骨髓得到染色體是比較簡(jiǎn)便的，一般也無需無菌操作。在臨床上多用于白血病的研究，在實(shí)驗(yàn)條件下，這種染色體是機(jī)體內(nèi)真實(shí)情況的反映，而且用骨髓制片的方法易于觀察毒性物質(zhì)在體內(nèi)對(duì)細(xì)胞和染色體的影響。
直接制片法，是直接從骨髓中取出細(xì)胞，經(jīng)壓片法或空氣干燥法制片。所謂空氣干燥法，實(shí)際上是將細(xì)胞經(jīng)過秋水仙素處理 ─ 低滲處理 ─ 充分的固定─ 滴片等步驟之后在載玻片上得到染色體制片的技術(shù)。有時(shí)，有人把滴片的步驟叫做染色體分散，也有人把這一步和隨后的干燥稱為空氣干燥法。“空氣干燥”就是滴片后，不加熱或任何處理，使載片在室溫下自然干燥的方法?？諝飧稍锓ㄊ且粋€(gè)十分有用的基本技術(shù)，要熟練掌握。
三、實(shí)驗(yàn)材料
小白鼠
四、實(shí)驗(yàn)器具和藥品試劑
冰箱、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、顯微鏡、分析天平、藥物天平、試管架、離心管、吸管、燒杯、量筒、注射器(1ml、5ml)、5號(hào)針頭、載玻片、解剖盤、解剖刀、剪刀、鑷子、酒精燈、切片盒、切片架、紗布。
秋水仙素、檸檬酸鈉、氯化鉀、冰醋酸、甲醇、磷酸緩沖液、Giemsa、甘油、
硫酸、重鉻酸鉀。
五、實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一) 秋水仙素處理 取骨髓前3～4小時(shí)先給小白鼠經(jīng)腹腔注入0. 1％的
秋水仙素，注射劑量為4毫克／每公斤動(dòng)物體重。
(二) 取骨髓 經(jīng)秋水仙素處理的小白鼠，可用損傷脊髓法處死，然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉，取出大腿骨和脛骨，用一小塊紗布來回搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關(guān)節(jié)頭，然后將股骨剪碎投入小燒杯中，用2毫升1％檸檬酸鈉溶液攪爛碎骨，使骨髓細(xì)胞游離出來。靜止片刻，用吸管把懸浮液吸到離心管中，可重復(fù)沖洗一次。此時(shí)離心管中的細(xì)胞懸浮液可達(dá) 4～5毫升。
(三) 低滲 將所獲得的細(xì)胞懸浮液先進(jìn)行平衡(注意：每次離心前都要平衡)，然后以 1000rpm離心10分鐘，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加0.075M KCL 溶液至8 毫升刻度，將細(xì)胞沉淀物吹散打勻，在水浴37℃ 低滲20～30分鐘。
(四) 固定 低滲處理后的材料，以1000rpm離心10分鐘，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，用吸管吹散沉淀物，沿管壁加固定液至6毫升, 沖勻后靜止固定20分鐘，即*次固定。按上述條件離心，去上清液，再次加入固定液至6ml，進(jìn)行第二次固定。20分鐘后離心吸去上清液，留0.2ml沉淀物,再往沉淀物中滴加4滴固定液，沖勻制成細(xì)胞懸液。
(五) 滴片 取事先在冰箱中預(yù)冷的載玻片(載玻片須經(jīng)硫酸洗液浸泡10天以上，經(jīng)清水沖洗，用蒸餾水浸泡)，滴2～3滴細(xì)胞懸液于粘有冰水的載玻片上，用嘴吹氣，使細(xì)胞迅速分散。將載片插放在切片架上晾干。
(六) 染色 取2張制片平放在玻璃板上，用10：1 Giemsa染液染色20分鐘，流水沖洗后晾干即可鏡檢。
(七) 觀察 用中倍鏡選擇分散適度，不重迭的染色體分裂相，轉(zhuǎn)高倍鏡詳細(xì)觀察小白鼠染色體的形態(tài)特征，并計(jì)算2n的染色體數(shù)目。
