MRC-5細(xì)胞 人胚肺細(xì)胞 細(xì)胞鑒定說明
觀察家禽巴氏桿菌病的臨診表現(xiàn)和病理解剖變化
掌握禽巴氏桿菌病的微生物學(xué)診斷方法
2．實驗內(nèi)容或原理
根據(jù)典型癥狀和病變，以及在顯微鏡下檢查組織涂片發(fā)現(xiàn)的兩極染色的桿菌，可初步診斷本病。但確診應(yīng)依靠病原分離鑒定，病原分離鑒定原理為革蘭氏染色法。
3．需用的儀器或試劑等
動物：雞、小白鼠
器材：外科鑷子、外科剪、滅菌紗布、載玻片、糖發(fā)酵管等。
藥品：草酸銨結(jié)晶紫、革蘭氏碘、碳酸復(fù)紅、瑞特氏染液、美藍(lán)染液、棉拭子、接種環(huán)、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、甘露醇、鼠李糖、戊醛糖、纖維二糖、綿子糖、菊糖、赤蘚糖、戊五醇、M—肌醇、水楊苷。胰蛋白酶、L-胱胺酸、瓊脂粉、酚紅。
MRC-5細(xì)胞 人胚肺細(xì)胞 細(xì)胞鑒定說明
4．實驗步驟
一、臨床癥狀和病理變化
⒈ 癥狀
急性癥狀:描述
慢性癥狀:描述
病理變化:描述
二 、微生物學(xué)診斷
JEG-3 人絨毛膜癌細(xì)胞
JeKo-1 人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
Jurkat, Clone E6-1 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
K-562 人慢性髓原白血病細(xì)胞
K7M2 wt [K7M2-WT] 小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞
Kasumi-1 人紅白血病細(xì)胞
KB 人口腔表皮樣癌細(xì)胞
KP-N-NS 人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(腦轉(zhuǎn)移)
KU812 人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞
L Wnt-3A 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞
L1210 小鼠白血病細(xì)胞
L5178Y TK+/- clone (3.7.2C) 小鼠淋巴瘤細(xì)胞
MRC-5細(xì)胞 人胚肺細(xì)胞 細(xì)胞鑒定說明
L6 大鼠成肌細(xì)胞
L6565 小鼠白血病克隆細(xì)胞系
Lec1 倉鼠卵巢細(xì)胞
Li-7 人肝癌細(xì)胞
LLC 小鼠肺癌細(xì)胞
LLC-MK2 恒河猴腎細(xì)胞
LNCaP clone FGC 人前列腺癌細(xì)胞
LoVo 人結(jié)腸癌細(xì)胞
LS 174T 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
LTEP-a-2 人肺腺癌細(xì)胞
M-20 人胚胎成纖維細(xì)胞
M-22 人胚胎成纖維細(xì)胞
M-7 人胚胎成纖維細(xì)胞
MC3T3-E1 Subclone 14 小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14
MCF7 [MCF-7] 人乳腺癌細(xì)胞
MDA-MB-231 人乳腺癌細(xì)胞
MDA-MB-415 人乳腺腺癌細(xì)胞
MDA-MB-435S 人乳腺導(dǎo)管癌
MDA-MB-436 人乳腺腺癌細(xì)胞
MDA-MB-453 人乳腺癌細(xì)胞
MDA-MB-468 人乳腺癌細(xì)胞
MDBK (NBL-1) 牛腎細(xì)胞
MDCK(NBL-2) 狗腎細(xì)胞
ME-180 人子宮頸表皮癌細(xì)胞
MEG-01 人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞
MFC 小鼠胃癌細(xì)胞
MG-63 人骨肉瘤細(xì)胞
MGC80-3 人胃癌細(xì)胞
MLTC-1 小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞
MNNG/HOS Cl #5 [R-1059-D] 人骨肉瘤細(xì)胞
MOLT-4 人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞
Mo-MuLV/3T3 小鼠Mo-MuLv感染的3T3細(xì)胞
MR1 [derivative of HB-11048] 中國倉鼠X小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤
MRC-5 人胚肺細(xì)胞
MS1 小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞
MS751 人子宮頸表皮癌細(xì)胞
MSTO-211H 人肺癌細(xì)胞株
Mv.1.Lu(NBL-7) 貂肺上皮細(xì)胞
NAMALWA 人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞
NCI-H1299 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H1395 人肺腺癌細(xì)胞
NCI-H1650 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H1688 人經(jīng)典小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H1975 人肺腺癌細(xì)胞
NCI-H292 人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)
NCI-H358 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H446 [H446] 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H460 [H460] 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H661 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H716 [H716] 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
抹片的制備
用鑷子夾持病變組織肝或脾，然后以滅菌剪刀剪取小塊，夾出后將其新鮮切面在載玻片上壓印或涂抹成薄層；若取血液，用滅菌剪刀剪開心臟進(jìn)行蘸取或剪取凝血塊，用新鮮切面在載玻片上壓印或涂抹成薄層。自然干燥。將干燥好的抹片，涂抹面向上，以其背面在酒精火焰上來回通過數(shù)次，略作加熱進(jìn)行固定。
革蘭氏染色法
固定好的抹片上滴加草酸銨結(jié)晶紫色液，染色2min→水洗+加革蘭氏碘溶液于抹片上媒染2min→水洗→加95％酒精于抹片上脫色1min→水洗→加稀釋碳酸復(fù)紅復(fù)染30s→水洗→吸干→鏡檢。巴氏桿菌為革蘭氏陰性球桿菌或短桿菌，單個或成對存在，常有莢膜。
其他染色法
甲醇固定，瑞特氏或美藍(lán)染色呈兩極濃染的菌體。
病原分離
（1）病料的采集：zui急性和急性病例可采集死亡禽只的肝、脾、心血；慢性病例一般采集局部病灶組織；對不新鮮或已被污染的樣品，可自骨髓中采取病料。采病料時用燒紅的刀片燒烙組織，而后用滅菌棉拭子或接種環(huán)通過燒烙表面插入組織或心血內(nèi)取樣。如果為活禽，可通過鼻孔擠出粘液，或?qū)⒚奘米硬迦氡橇阎腥印?br />（2）培養(yǎng)基制備：馬丁瓊脂培養(yǎng)基（本實驗中采用該培養(yǎng)基）、5％雞血清葡萄糖淀粉瓊脂、鮮血瓊脂培養(yǎng)基。
（3）動物接種：如果病料污染嚴(yán)重，則可將0.2mL碾碎的病料，經(jīng)皮下或腹腔內(nèi)接種家兔、小鼠或易感雞，接種動物在24h～48h內(nèi)死亡，可以從肝臟、心血中分離到巴氏桿菌。
（4）培養(yǎng)：將病料接種于馬丁瓊脂培養(yǎng)基在35℃～37℃下培養(yǎng)，經(jīng)18h～24h培養(yǎng)后菌落直徑為1mm～3mm，菌落呈散在、圓形，表面凸起呈奶滴狀。
