大鼠骨髓瘤細(xì)胞IR983F細(xì)胞特性
現(xiàn)代病毒研究往往需要大量的純病毒粒子，以便于化學(xué)研究或制備抗體。在這里我們簡(jiǎn)明地描述一下脊髓灰質(zhì)炎病毒（Polio virus）的純化步驟。它是一種已被廣泛研究的危害人體健康的病毒。
在開(kāi)展人體病毒實(shí)驗(yàn)工作以前，讓實(shí)驗(yàn)工作人員獲得抵抗這種病毒的免疫力是非常必要的。脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗很容易獲得，大多數(shù)工作人員可能已經(jīng)獲得免疫，但重新免疫是必要的預(yù)防措施。
病毒的純化步驟主要是：1.在大規(guī)模的裝置中培養(yǎng)病毒；2.去除富含病毒培養(yǎng)液；3.通過(guò)沉淀將病毒濃縮；4.通過(guò)密度梯度離心zui終純化病毒?，F(xiàn)在我們講解每個(gè)步驟的一些細(xì)節(jié)。
大鼠骨髓瘤細(xì)胞IR983F細(xì)胞特性
小鼠淋巴瘤細(xì)胞(NK靶細(xì)胞)YAC-1
小鼠單核巨噬細(xì)胞J774A.1
小鼠T淋巴瘤細(xì)胞Cyc-Tag(S49)
小鼠血細(xì)胞WEHI-3
小鼠B淋巴細(xì)胞WEHI 231
小鼠淋巴細(xì)胞白血病L1210
小鼠T淋巴細(xì)胞Cl.Ly1+2-/9
小鼠淋巴瘤細(xì)胞P388D1(IL-1)
小鼠漿細(xì)胞瘤MPC-11
小鼠睪丸支持細(xì)胞（PyTL基因修飾）15P-1
小鼠T淋巴瘤細(xì)胞E.G7-OVA
小鼠巨噬細(xì)胞Ana-1
小鼠淋巴瘤細(xì)胞EL4
小鼠淋巴瘤細(xì)胞EL4.IL-2
小鼠白血病細(xì)胞L1210
小鼠淋巴瘤細(xì)胞L5178Y TK+/-clone(3.7.2C)
小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞RAW 264.7
小鼠淋巴瘤細(xì)胞P388D1
大鼠肺泡巨噬細(xì)胞NR8383
大鼠氣管上皮細(xì)胞RTE
大鼠肺成纖維樣細(xì)胞RL1
大鼠肺細(xì)胞WTRL1
大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞A7r5
大鼠心肌細(xì)胞H9c2(2-1)
大鼠肝細(xì)胞瘤H-4-Ⅱ-E
大鼠肝細(xì)胞IAR20
大鼠肝細(xì)胞瘤H4-Ⅱ-E-C3
大鼠肝細(xì)胞BRL
大鼠肝細(xì)胞BRL 3A
大鼠肝癌細(xì)胞RH-35
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞PC-12
正常大鼠腎細(xì)胞NRK
大鼠腎小球系膜細(xì)胞HBZY-1
大鼠腎細(xì)胞RK1
大鼠腎細(xì)胞NRK-52E
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化)PC-12
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化)PC-12
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化)PC-12
大鼠垂體瘤細(xì)胞GH3
大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6
大鼠雪旺細(xì)胞RSC96
大鼠骨髓瘤細(xì)胞Y3-Ag1.2.3
大鼠纖維母細(xì)胞1/EJ 1-1
大鼠皮膚成纖維樣細(xì)胞RS1
大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞RM1
大鼠骨髓瘤細(xì)胞IR983F
1.在大型裝置中培養(yǎng)細(xì)菌。為獲得足夠的用于化學(xué)研究的病毒，必須制備大量病毒。每種病毒的培養(yǎng)都有不同的步驟。脊髓灰質(zhì)炎病毒是在人或靈長(zhǎng)類動(dòng)物細(xì)胞系中培養(yǎng)的，可以培養(yǎng)在一大瓶中沿壁生長(zhǎng)的單層細(xì)胞上，也可以在一個(gè)輕輕攪拌的細(xì)胞懸液中。在有利病毒生長(zhǎng)的條件下，每個(gè)宿主細(xì)胞能生產(chǎn)10～1000的感染單位的病毒，即每毫升一個(gè)感染單位的滴度（或稱效價(jià)）。
2.富含病毒培養(yǎng)液的去除。病毒的生長(zhǎng)和釋放伴隨著細(xì)胞的破損。在病毒復(fù)制完成的時(shí)候，培養(yǎng)液中大多數(shù)細(xì)胞已經(jīng)變成了細(xì)胞碎片。為使所有病毒分子*釋放，要通過(guò)反復(fù)冷凍—融化的循環(huán)過(guò)程使細(xì)胞進(jìn)一步破碎。然后將富含病毒的液體從培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到離心試管中。低速離心除去大分子的細(xì)胞殘骸。
3.通過(guò)沉淀將病毒物質(zhì)濃縮。由于病毒是蛋白質(zhì)性質(zhì)的，它們能通過(guò)蛋白質(zhì)沉淀法沉淀。脊髓灰質(zhì)炎病毒可通過(guò)高濃度的NH4Cl（每毫升培養(yǎng)液中加0.4g）沉淀下來(lái)。這一過(guò)程要在低溫下進(jìn)行，NH4Cl要在攪拌下緩慢加到培養(yǎng)液中。由于病毒蛋白沉降，溶液將變得渾濁。將沉淀物通過(guò)低速離心（2000g，1-2hr）。然后將含有病毒分子的沉淀物在少量磷酸鹽緩沖液中再次懸浮培養(yǎng)。這一步驟可濃縮病毒大約10倍，99％以上的病毒粒子可沉淀回收。
4.通過(guò)密度梯度離心zui終純化病毒。脊髓灰質(zhì)炎病毒可以通過(guò)蔗糖或CSCl的密度梯度離心純化。在后者中，病毒在離心試管中成為一個(gè)分離帶，這一過(guò)程與對(duì)DNA的分離相同，離心須要高速，即120000g,且要進(jìn)行好幾個(gè)小時(shí)，是一整夜。離心管中的液體通過(guò)試管底部的一點(diǎn)點(diǎn)滴出來(lái)，要檢測(cè)每一滴的病毒滴度。在合適的離心條件下，所有的病毒分子都集聚在一或兩個(gè)組分中，所以它們是非常純的。結(jié)晶脊髓灰質(zhì)炎病毒。如果能在合適的條件下濃縮大量且高純度的病毒，就可以獲得病毒晶體。這種晶體為化學(xué)分析提供了很好的材料，且易于通過(guò)X射線衍射技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。
本章的部分講到的脊髓灰質(zhì)炎病毒的計(jì)算機(jī)擬合就是從這種高濃度脊髓灰質(zhì)炎的病毒晶體獲得的。
