人包皮成纖維細(xì)胞HFF細(xì)胞株
一、概述
免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry）或稱免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry），是指用經(jīng)標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過特異性抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)的呈色反應(yīng)，對相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量測定的一項(xiàng)技術(shù)。它將抗原抗體免疫反應(yīng)的特異性、組織化學(xué)的可見性巧妙地結(jié)合起來，借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像與放大作用，在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平檢測各種細(xì)胞組織成分，如蛋白質(zhì)、多肽、核酸、部分類酯、多糖、激素、病原體（寄生蟲、細(xì)菌病毒）、受體、神經(jīng)介質(zhì)、腫瘤的標(biāo)記物（抗原或相關(guān)抗原）等。一般認(rèn)為，凡具有抗原性或半抗原性物質(zhì)都可以用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢查并顯示出來，并可在光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其性質(zhì)定位，還可以利用細(xì)胞分光光度計(jì)、圖像分析儀、共聚焦顯微鏡等進(jìn)行細(xì)胞原位定量測定。
免疫組織細(xì)胞染色技術(shù)發(fā)展的簡要?dú)v史
Coons及其同事于1941年應(yīng)用熒光素標(biāo)記的抗體檢測肺組織中的肺炎雙球菌獲得成功，揭開了免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的新篇章。隨后，Nakane建立了酶標(biāo)記的抗體技術(shù)，而Sternberger在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步通過改良所建立起來的辣根過氧化酶-抗過氧化物酶（PAP）技術(shù)使得免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)得到了廣泛的應(yīng)用。等到上世紀(jì)80年代，抗生物素-生物素（ABC）法、免疫金-銀染色法、半抗原標(biāo)記法、免疫電鏡技術(shù)等相繼誕生，進(jìn)一步豐富了免疫化學(xué)技術(shù)的內(nèi)涵，使之成為當(dāng)今生物醫(yī)學(xué)中重要的研究手段，在生物基礎(chǔ)研究、臨床診斷發(fā)揮著重要作用。
免疫組織細(xì)胞染色技術(shù)的基本過程
免疫組織化學(xué)的全過程包括：（1）抗原的提取與純化；（2）免疫動(dòng)物或細(xì)胞融合，制備特異性抗體以及抗體的純化；（3）標(biāo)記抗體的制備；（4）組織細(xì)胞標(biāo)本的制備；（5）免疫細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)及呈色反應(yīng)；（6）結(jié)果的觀察與分析。有關(guān)抗原的提取與純化、抗體的制備與純化的方法請參考相關(guān)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)手冊，本文將結(jié)合不同類型的免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)選擇性介紹標(biāo)記抗體的制備、組織細(xì)胞標(biāo)本的制備、免疫化學(xué)反應(yīng)等技術(shù)過程。
二、組織細(xì)胞標(biāo)本的制備
人包皮成纖維細(xì)胞HFF細(xì)胞株（一）細(xì)胞標(biāo)本的取材
1、體細(xì)胞取材方法
印片法：主要用于從活組織檢查標(biāo)本和手術(shù)切除標(biāo)本中獲取細(xì)胞。首先將標(biāo)本剖開，zui大程度暴露組織病變區(qū)，然后將載玻片輕壓于病變組織區(qū)，吸附脫落的細(xì)胞。
穿刺取樣涂片法：用細(xì)針穿刺從實(shí)質(zhì)性器官（如肝、腎、脾、淋巴結(jié)、軟組織、骨髓）的病變區(qū)吸取病變區(qū)的體液，然后進(jìn)行涂片。
體液沉淀涂片法：主要適用于胸水、腹水、尿液、腦脊液等含細(xì)胞較少的標(biāo)本，先通過離心獲取細(xì)胞沉淀，經(jīng)適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行涂片。
人包皮成纖維細(xì)胞HFF
人羊膜細(xì)胞WISH
人羊膜細(xì)胞HA
人胚胎干細(xì)胞E1C4
人羊膜細(xì)胞HAN
人宮頸癌細(xì)胞HeLa
人卵巢畸胎瘤細(xì)胞PA-1
人卵巢腺癌細(xì)胞SK-OV-3
人宮頸癌細(xì)胞Ca Ski
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞HEC-1-B
人胎盤絨膜癌細(xì)胞BeWo
人宮頸癌細(xì)胞C-33A
人胚胎干細(xì)胞E1C2
人宮頸癌細(xì)胞Hela P10s-11F
人宮頸癌細(xì)胞Hela S3
人子宮頸癌細(xì)胞（GFP基因修飾）HeLa-GFP
人卵巢癌細(xì)胞Caov-3
人宮頸癌細(xì)胞H1HeLa
人卵巢癌細(xì)胞A2780
人宮頸癌細(xì)胞Hela 229
人卵巢癌細(xì)胞HO-8910
人子宮鱗癌細(xì)胞（高分化）HCC-94
人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞ES-2
人子宮頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞SiHa
人胚胎干細(xì)胞Endeavour-1
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞HEC-1-A
人胎盤絨毛癌細(xì)胞JAR
人卵巢癌細(xì)胞COC1
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞RL95-2
人卵巢腺癌細(xì)胞OVCAR-3
人胚胎干細(xì)胞HES 3.3
人胚胎干細(xì)胞SH.hEXl(46.xx)
人胚胎干細(xì)胞HES 3.2
人胚胎干細(xì)胞HES 3.1
人胚胎干細(xì)胞E1C1
2、培養(yǎng)細(xì)胞取材方法
（1） 細(xì)胞爬片法：適合于貼壁生長的培養(yǎng)細(xì)胞。將干凈的蓋玻片放置入培養(yǎng)液中，細(xì)胞便會(huì)自然貼附在其上。
（2） 涂片法：適合于懸浮生長的培養(yǎng)細(xì)胞。直接取懸浮生長的培養(yǎng)細(xì)胞或通過離心收集細(xì)胞，再經(jīng)適當(dāng)?shù)南礈旌拖♂尯筮M(jìn)行涂片。
3、組織材料的獲取
主要通過組織切片技術(shù)獲得。根據(jù)包埋劑的不同可分為：冰凍切片、石蠟切片、塑料切片、超薄切片、碳臘切片等類型。
（二）細(xì)胞和組織的固定
固定的目的是為了更好地將細(xì)胞和組織的原有形態(tài)結(jié)構(gòu)及成分保留下來，讓蛋白質(zhì)變性，使內(nèi)源性消化酶失活。對免疫組化而言，可用的固定劑種類多樣，性能也不盡相同，在使用時(shí)應(yīng)注意考慮不同固定劑對抗原的影響，防止抗原的彌散以及活性的丟失。
常見的固定劑有醛類（如10％的中性緩沖福爾馬林，4％的多聚甲醛等）、非醛類（如碳化二亞胺、對苯醌等）、丙酮及醇類固定劑。常見的固定方法有浸入法和灌注法等。
