人羊膜細(xì)胞HA細(xì)胞 細(xì)胞來源
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br />學(xué)習(xí)凱氏定氮法的原理和操作技術(shù)。
【實(shí)驗(yàn)原理】
凱氏定氮法用于測定有機(jī)物的含氮量,若蛋白質(zhì)的含氮量已知時(shí)，則可用此法測定樣品中蛋白質(zhì)的含量。
當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與濃硫酸共熱時(shí)，其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水，而氮?jiǎng)t轉(zhuǎn)變成氨，并進(jìn)一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程通常稱為“消化”。但是，這個(gè)反應(yīng)進(jìn)行得比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應(yīng)液的沸點(diǎn)，并加入硫酸銅作為催化劑，以促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行。
消化完成后，在凱氏定氮儀中加入濃堿，可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨，借助水蒸汽蒸餾法，將產(chǎn)生的氨蒸餾到一定量、一定濃度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨與溶液中氫離子結(jié)合，使溶液中的氫離子濃度降低，指示劑顏色改變，然后用標(biāo)準(zhǔn)無機(jī)鹽酸滴定，直至恢復(fù)溶液中原來的氫離子濃度為止。根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸的量可計(jì)算出待測物中的總氮量。
蛋白質(zhì)的含氮量為16%，即1克蛋白質(zhì)中的氮相當(dāng)于6.25克蛋白質(zhì)，用凱氏定氮法測出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質(zhì)的含量。
【實(shí)驗(yàn)材料】
人羊膜細(xì)胞HA細(xì)胞 細(xì)胞來源：
人胎兒胸腺細(xì)胞株HFT-8810
人前列腺上皮細(xì)胞RWPE-1
人前列腺正常細(xì)胞RWPE-2
人男性正常龜頭細(xì)胞Hs68
人整合 SV40基因的乳腺上皮細(xì)胞HBL-100
人前列腺癌細(xì)胞DU 145
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231
人前列腺癌細(xì)胞LNCaP
人乳腺癌細(xì)胞MCF 7B
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-157
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞ZR-75-1
人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞UACC812
人前列腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株P(guān)C-3M-IE8
人前列腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株P(guān)C-3M-2B4
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞HCC38
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞ZR-75-30
人乳腺癌瘤株MCF7
人乳腺癌細(xì)胞BT-20
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞BT-549
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞MDA-MB-175Ⅶ
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-415
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞MDA-MB-435
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-436
人乳腺癌細(xì)胞Bcap-37
人前列腺癌細(xì)胞LNCaP clone FGC
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-453
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435S
人乳腺癌細(xì)胞SK-BR-3
人髓狀甲狀腺腫瘤細(xì)胞TT
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞T47D
人乳腺癌細(xì)胞BT-549
人前列腺癌細(xì)胞22Rv1
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468
人甲狀腺鱗癌細(xì)胞SW579
人乳腺癌細(xì)胞Hs 578T
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468-06
人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞BT-474
人乳腺癌細(xì)胞HCC1937
人前列腺癌細(xì)胞PC-3
人乳腺癌細(xì)胞ZR-75-30
人乳腺癌細(xì)胞MCF7
人乳腺癌細(xì)胞BC－009
人乳腺癌細(xì)胞BC－019
人乳腺癌細(xì)胞BC－020
人乳腺癌細(xì)胞BC－021
人乳腺癌細(xì)胞BC－022
1.實(shí)驗(yàn)器材
微量凱氏定氮儀 1套；50ml凱氏燒瓶 4個(gè)；移液管；錐形瓶；試管；小玻璃珠
2.試驗(yàn)試劑
(1) 濃硫酸；30％氫氧化鈉溶液；2％硼酸溶液；標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(0.01mol／L)。
(2) 粉末硫酸鉀—硫酸銅混合物 ：K2SO4與CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。
(3)混合指示劑(田氏指示劑)：由50ml 0.1％甲烯藍(lán)乙醇溶液與200ml 0.1％甲基紅乙醇溶液混合配成，貯于棕色瓶中備用。
(4) 樣品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作為樣品。
【實(shí)驗(yàn)操作】
1.安裝凱氏定氮儀。
2.消化：取4個(gè)50ml凱氏燒瓶并標(biāo)號,各加1顆玻璃珠，在1號及2號瓶中各加樣品1ml，催化劑(K2SO4- CuSO4·5H2O)200 mg，濃硫酸5 ml。注意加樣品時(shí)應(yīng)直接送入瓶底，而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3號及4號瓶中各加1 ml蒸餾水和與1、2號瓶相同量的催化劑和濃硫酸，作為對照。在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行消化。
在消化開始時(shí)應(yīng)控制火力，不要使液體沖到瓶頸。待硫酸開始分解并放出SO2白煙后，適當(dāng)加強(qiáng)火力，繼續(xù)消化，直至消化液呈透明淡綠色為止。撤掉火力，冷卻至室溫。
