細(xì)胞株的凍存、復(fù)蘇
為了防止因污染或技術(shù)原因使長(zhǎng)期培養(yǎng)功虧一簣，考慮到培養(yǎng)細(xì)胞因傳代而遲早會(huì)出現(xiàn)變異，有時(shí)因寄贈(zèng)、交換和購(gòu)買，培養(yǎng)細(xì)胞從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，*的策略是進(jìn)行低溫保存。這對(duì)于維持一些特殊細(xì)胞株的遺傳特性極為重要?，F(xiàn)簡(jiǎn)要介紹深低溫保存法（-70℃~-196℃）的特點(diǎn)。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是：在-70℃以下時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止，即代謝處于*停止?fàn)顟B(tài)，故可以長(zhǎng)期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵，在于通過(guò)0~20℃階段的處理過(guò)程。在此溫度范圍內(nèi)，水晶呈針狀，極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。
細(xì)胞株的凍存、復(fù)蘇
傳代細(xì)胞可提供復(fù)蘇，凍存細(xì)胞，ATCC細(xì)胞。具體可根據(jù)科研人員要求決定。代做各種細(xì)胞服務(wù)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸（倒）盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。具體情況根據(jù)說(shuō)明書操作，或致電本公司技術(shù)人員。
細(xì)胞株的凍存、復(fù)蘇
A549 [A-549]細(xì)胞人肺癌細(xì)胞
CHO/dhFr-細(xì)胞中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（二氫葉酸還原型缺陷型）
CHO-K1細(xì)胞
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1（亞系克?。?/div>
Cyc-Tag（S49）細(xì)胞小鼠T淋巴瘤細(xì)胞
DU 145 [DU145；DU-145]人前列腺癌細(xì)胞
FDC-P1細(xì)胞小鼠骨髓細(xì)胞
GH3細(xì)胞大鼠垂體瘤細(xì)胞
GT1-1細(xì)胞小鼠垂體瘤細(xì)胞
293 [HEK-293；HEK293]細(xì)胞人胚腎細(xì)胞
HeLa細(xì)胞人宮頸癌細(xì)胞
MC3T3-E1細(xì)胞小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞
MCF7 [MCF-7]細(xì)胞人乳腺癌細(xì)胞
MDA-MB-231細(xì)胞人乳腺癌細(xì)胞
MDA-MB-435S細(xì)胞人乳腺癌細(xì)胞
MDA-MB-453細(xì)胞人乳腺癌細(xì)胞
NG108-15 [108CC15]細(xì)胞小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞與大鼠膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞之融合細(xì)胞
NIH/3T3細(xì)胞小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
NTERA-2細(xì)胞人惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞
P19細(xì)胞小鼠睪丸畸胎瘤細(xì)胞
PA-1細(xì)胞人卵巢畸胎瘤細(xì)胞
PA12細(xì)胞小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
PANC-1細(xì)胞人胰腺癌細(xì)胞
PC-12 [PC12]細(xì)胞大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞
Saos-2細(xì)胞人成骨肉瘤細(xì)胞
SH-SY5Y細(xì)胞人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
SK-OV-3 [SKOV3]細(xì)胞人卵巢腺癌細(xì)胞
U-2 OS [U2OS；U2-OS；U-2OS]細(xì)胞人骨肉瘤細(xì)胞
WEHI-3 [WEHI3]小鼠血細(xì)胞
Φ2細(xì)胞小鼠成纖維細(xì)胞
A-204細(xì)胞人橫紋肌肉瘤細(xì)胞
Calu-3細(xì)胞人肺腺癌細(xì)胞
COS-7 [COS7]細(xì)胞非洲綠猴腎細(xì)胞（SV40轉(zhuǎn)化）
一、細(xì)胞的凍存:為避免污染造成的損失，zui小化連續(xù)細(xì)胞系的遺傳改變和避免有限細(xì)胞系的老化和轉(zhuǎn)化，需要凍存哺乳細(xì)胞。凍存細(xì)胞前，細(xì)胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。
有幾種普通培養(yǎng)基用來(lái)凍存細(xì)胞。對(duì)于包含有血清的培養(yǎng)基，成分可能如下：
◆包含10%甘油的*培養(yǎng)基，
◆包含10%二甲基亞砜（DMSO）的*培養(yǎng)基，
◆50%細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%甘油的新鮮培養(yǎng)基，或
◆50%細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。
對(duì)于無(wú)血清培養(yǎng)基，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：
◆50%細(xì)胞條件無(wú)血清培養(yǎng)基和50%包含有7.5%二甲基亞砜的新鮮的無(wú)血清培養(yǎng)基，或
◆包含有7.5%二甲基亞砜和10%細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)BSA的新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基。
1.懸浮細(xì)胞
●計(jì)數(shù)將要凍存的活細(xì)胞。細(xì)胞應(yīng)該處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。以大約200～400g離心5分鐘沉淀細(xì)胞，使用移液管移去上清到zui小體積，不要攪亂細(xì)胞。
●以1×107到5×107細(xì)胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細(xì)胞，或者以0.5×107到1×107在無(wú)血清培養(yǎng)基中，再次懸浮細(xì)胞。
●分裝進(jìn)凍存管，將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中，5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。
●細(xì)胞以1℃/分鐘進(jìn)行冷凍，可以通過(guò)可編程序的冷凍器進(jìn)行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。
2.貼壁細(xì)胞
●使用分離試劑從基層分離細(xì)胞，分離時(shí)盡可能溫和，使對(duì)細(xì)胞的損傷減少到zui小。
●在*生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，再次懸浮分離細(xì)胞，確定有活力細(xì)胞數(shù)。
●以大約200g離心5分鐘沉淀細(xì)胞。使用移液管移去上清到zui小體積，不要攪亂細(xì)胞。
●以5×106到1×106細(xì)胞/ml密度，在凍存液中懸浮細(xì)胞。
●分裝進(jìn)凍存管，將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中，5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。
●細(xì)胞以1℃/分鐘進(jìn)行冷凍，可以通過(guò)可編程序的冷凍器進(jìn)行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。
