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中級(jí)會(huì)員 | 第13年

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ATCC細(xì)胞
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染色體顯帶技術(shù)

時(shí)間:2013/10/30閱讀:1397
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 染色體顯帶技術(shù)

  
  
  一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>
  1、了解染色體顯帶技術(shù)的發(fā)展與基本知識(shí);
  2、掌握染色體C帶技術(shù)。
  二、實(shí)驗(yàn)原理
  所謂染色體顯帶技術(shù)指借助特殊的處理后,再用染料對(duì)染色體進(jìn)行分化染色,使其呈現(xiàn)特定帶紋的一種細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)。如C帶、G帶等。顯帶處理后,染色體上帶紋的數(shù)目、位置、寬窄與染色的深淺具有相對(duì)的穩(wěn)定性與一定的種屬特異性。它為不同物種之間的進(jìn)化關(guān)系的研究提供了一個(gè)有效手段。C帶是特異的顯示結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)的帶,它專(zhuān)一地顯示著絲粒區(qū)域的結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)。
  三、實(shí)驗(yàn)材料
  實(shí)驗(yàn)五與實(shí)驗(yàn)二制備的染色體玻片標(biāo)本若干片
  四、器具及藥品
  顯微鏡,電子天平,恒溫水浴鍋,玻片架,解剖器,染色缸,白瓷板,氫氧化鋇, 化鈉,檸檬酸鈉,吉姆薩,磷酸緩沖液。
  五、實(shí)驗(yàn)步驟
 ?、錌SG法顯示C帶
  1、將3-7天的實(shí)驗(yàn)5染色體制片放入0.2mol/l的鹽酸中處理1小時(shí)。
  2、蒸餾水沖洗后,轉(zhuǎn)入50℃的5%的氫氧化鋇溶液中5-15分鐘。時(shí)間由經(jīng)驗(yàn)得來(lái)。
  3、同溫蒸餾水沖洗,直至氫氧化鋇沖凈為止,如果沖不凈,可放入0.2mol/l的鹽酸中2秒鐘,再用蒸餾水沖洗干凈,晾干。或連同染色缸放在自來(lái)水下沖洗,直至氫氧化鋇溶液沖洗干凈,因鋇遇空氣易形成不溶于水的碳酸鋇膜,污染制片,使染色體無(wú)法顯帶。換入蒸餾水,每隔4-5分鐘換水一次,重復(fù)3次左右。
  4、轉(zhuǎn)入60℃的2×SSC溶液中恒溫水浴1小時(shí),同溫蒸餾水沖洗,自然干燥。
  5、染色
  10%Giemsa液(PH=6.8)扣染1hr,蒸餾水沖洗。
  6、鏡檢
  7、拍照
  ㈡HSG法顯示C帶
  1、將3-7天的實(shí)驗(yàn)5染色體制片放入0.2mol/l的鹽酸中處理1小時(shí)。
  2、蒸餾水沖洗后,轉(zhuǎn)入60℃的2×SSC溶液中恒溫水浴1小時(shí),同溫蒸餾水沖洗,自然干燥。
  3、染色
  10%Giemsa液(PH=6.8)扣染1hr,蒸餾水沖洗。
  4、鏡檢
  5、拍照
  
   
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