細(xì)胞:H508細(xì)胞
中文名稱:人結(jié)腸癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢萠酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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植入人體細(xì)胞的某種酵母的轉(zhuǎn)移RNA(核糖核酸)能夠進(jìn)入人體細(xì)胞線粒體并影響線粒體蛋白的合成,從而可能改變線粒體部分功能。這一發(fā)現(xiàn)有助于研究新方法治療由線粒體工作異常引起的神經(jīng)、肌肉疾病。
如果人體細(xì)胞內(nèi)的線粒體轉(zhuǎn)移RNA發(fā)生基因點(diǎn)突變,造成線粒體無(wú)法正常工作,就可能導(dǎo)致線粒體較集中、肌肉和神經(jīng)發(fā)達(dá)且耗能多的人體器官工作受影響,產(chǎn)生某些嚴(yán)重疾病。
如果能將來(lái)自外部的轉(zhuǎn)移RNA植入某些病人的細(xì)胞并修復(fù)線粒體的部分功能,則可能達(dá)到治療疾病的目的。專家聯(lián)合進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)正是基于這一構(gòu)想而進(jìn)行的。
對(duì)酵母轉(zhuǎn)移RNA進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)了幫助轉(zhuǎn)移RNA進(jìn)入線粒體的特殊結(jié)構(gòu)。在此基礎(chǔ)上,將某種酵母賴氨酸轉(zhuǎn)移RNA植入單個(gè)人體細(xì)胞。結(jié)果,被植入的轉(zhuǎn)移RNA成功進(jìn)入了人體細(xì)胞線粒體內(nèi)部。
研究結(jié)果:人體細(xì)胞線粒體內(nèi)部合成的蛋白含有了被酵母賴氨酸轉(zhuǎn)移RNA帶入的氨基酸。這表明,被植入人體細(xì)胞的轉(zhuǎn)移RNA可能會(huì)改變?nèi)梭w細(xì)胞線粒體的部分功能。
這項(xiàng)研究的進(jìn)展目前離活體動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)尚遠(yuǎn)。但是,來(lái)自外部的轉(zhuǎn)移RNA可能改變?nèi)梭w細(xì)胞線粒體部分功能這一發(fā)現(xiàn)表明,人們可嘗試開(kāi)發(fā)基因療法,治療由線粒體轉(zhuǎn)移RNA發(fā)生基因點(diǎn)突變引起的人體疾病。