細(xì)胞：AML12細(xì)胞

中文名稱：小鼠正常肝細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞

培養(yǎng)基：D/F12+10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

AML12細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（ 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作）

1． 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通常控制在 1-2min）

2． 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ魕i酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。

3． 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4． 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；）

JCB核孔轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間和效率取決于輸入素的濃度:

組成NPC的特征蛋白為糖蛋白gp210和核孔素（nucleoporin, Nup）；糖蛋白gp210為一種跨核膜的N-連接糖蛋白，（通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：Ecv304細(xì)胞株）能與伴刀豆球蛋白A強(qiáng)烈結(jié)合，作用是將NPC固定于核膜上；

核孔素為一組由8～12種O-連接糖蛋白構(gòu)成的蛋白家族，（通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：T-24細(xì)胞株）與麥胚凝集素(WAG)親和，廣泛分布于NPC孔周圍，在細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核內(nèi)也可檢出，作用與生物分子的核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。

在分子結(jié)構(gòu)上gp210有錨定NPC核膜的結(jié)合域及與親核素蛋白結(jié)合的結(jié)合域，（通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：Pc-3m細(xì)胞株）而核孔素蛋白分子上至少有三類重復(fù)序列，其中N末段有FG二肽結(jié)構(gòu)域［3，4］，這些序列都是生物大分子進(jìn)行核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的分子基礎(chǔ)。

生物大分子的細(xì)胞核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程；在入核轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中存在于胞質(zhì)中的具有核定位信號(hào)肽(nuclear location signal,NLS)的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（簡(jiǎn)稱NLS蛋白）；（通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：CEF細(xì)胞株）首先與NPC附近Importin α結(jié)合，Importin α再與Importin β相結(jié)合形成NLS-Importin α/β復(fù)合體。

然后NPC內(nèi)核孔素蛋白通過(guò)其自身重復(fù)序列與Importin β結(jié)合，（通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：HEB細(xì)胞株）并將NLS-Importin α/β復(fù)合體定位(docking)在NPC胞質(zhì)纖絲上，隨后胞質(zhì)纖絲發(fā)生彎曲將其復(fù)合體依次遞呈到細(xì)胞NPC中央插銷蛋白上，并與核質(zhì)纖絲發(fā)生結(jié)合、解離平衡，復(fù)合體被送入細(xì)胞核內(nèi)。