細胞：A875細胞

中文名稱：人黑色素瘤細胞

生長特性：貼壁細胞

培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

A875細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（ 請嚴格遵照無菌操作）

1． 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意把握消化時間，通?？刂圃?1-2min）

2． 鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂?。┤サ魕i酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。

3． 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4． 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細胞密度達到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）

核孔復(fù)合體模型及其結(jié)構(gòu)蛋白；

根據(jù)高倍電子顯微鏡對青蛙卵細胞、昆蟲細胞、（通派細胞庫供應(yīng)：WRL68細胞株）脊椎動物細胞和酵母細胞等的研究人們提出了核孔復(fù)合體的圓柱狀模型，該模型認為細胞核膜由內(nèi)、外兩層核膜組成，兩核膜之間為核間腔（nuclear lumen）；

內(nèi)外兩側(cè)核膜以外分別為核液面和胞質(zhì)面；（通派細胞庫供應(yīng)：L929細胞株）每個NPC由對稱的8分子幅蛋白（spoke）將內(nèi)、外兩層核膜粘在一起且8分子幅蛋白相互圍成一疏水孔道；孔中心有一中央插銷蛋白（central plug，transporter），中央插銷蛋白控制著生物大分子出入NPC的速率或啟閉；

幅蛋白與內(nèi)層核膜融合為一胞質(zhì)環(huán)(cytoplasmic ring)，（通派細胞庫供應(yīng)：95d-nc細胞株）胞質(zhì)環(huán)引出八根長30～50nm游離于胞質(zhì)的胞質(zhì)纖絲(cytoplasmic filament)；同樣，幅蛋白與外層核膜融合成一核質(zhì)環(huán)(nuclear ring)，核質(zhì)環(huán)上引出八根長100nm提籃纖絲(basket filament)

由一根終末環(huán)（terminal ring）將提籃纖絲的另一端連在一起形成提籃樣網(wǎng)筐(nuclear basket)結(jié)構(gòu)。

核質(zhì)環(huán)直接與核內(nèi)核纖層蛋白(nuclear lamina)相連，（通派細胞庫供應(yīng)：Nrk-52e細胞株）終末環(huán)與核內(nèi)纖絲樣核網(wǎng)格(nuclear lattice)骨架蛋白相連，形成核內(nèi)復(fù)雜的高級網(wǎng)格骨架基礎(chǔ)。

當生物小分子通過NPC進行自由擴散時NPC孔徑約9nm，（通派細胞庫供應(yīng)：5-8f-m細胞株）生物大分子進行主動轉(zhuǎn)運時孔徑可達25nm，可見NPC結(jié)構(gòu)并不是剛性的。

NPC數(shù)目、位置和孔徑均處于周期性變化，NPC隨機分布于細胞核表面上，不同時期細胞核表面上NPC數(shù)目不一樣，NPC數(shù)量最多時可達107個/核。