細胞:Mv.1.Lu細胞
中文名稱:貂肺上皮細胞
生長特性:貼壁細胞
培養(yǎng)基:MEM+1%NEAA+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
Mv.1.Lu細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。
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研究小組選定了兩個miRNA相關(guān)基因:miR-1-1 and miR-1-2,(通派細胞庫供應(yīng):WISH細胞株)這兩個基因產(chǎn)物在心臟和肌肉組織中大量表達。
由于在胚胎結(jié)構(gòu)中定位miRNAs十分困難,(通派細胞庫供應(yīng):L-o2細胞株)所以研究人員利用了一個可以產(chǎn)生藍點的報告基因來便于定位miRNAs。
他們將報告基因接到miR-1-1的前端,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在胚胎期小鼠的心臟和肌肉中都發(fā)現(xiàn)有報告基因的表達,(通派細胞庫供應(yīng):Chang Liver細胞株)并且這種表達受到幾個心臟和肌肉關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子(serum response factor (SRF), Mef2 和 MyoD)的調(diào)控。
這個結(jié)果表明miRNAs就像其它一般的基因一樣的受到調(diào)控,(通派細胞庫供應(yīng):HL-7702細胞株)因此可能miRNAs也會對和其它基因一樣的“發(fā)育暗示"做出反應(yīng)。
研究者的這一發(fā)現(xiàn)開啟了器官形成過程中調(diào)控的一個全新的研究視角,(通派細胞庫供應(yīng):BT-B細胞)即通過miRNA調(diào)控器官發(fā)育形成。但是許多問題還未知,需要進一步進行研究。