細(xì)胞:H1944細(xì)胞
中文名稱:人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
H1944細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ魕i酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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microRNA在心臟細(xì)胞生長(zhǎng)及分化過程中的作用
MicroRNAs是一種大小約21—23個(gè)堿基的單鏈小分子RNA,是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70-90個(gè)堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過Dicer酶加工后生成,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):KB細(xì)胞株)不同于sirna(雙鏈)但是和siRNA密切相關(guān)。
這些非編碼小分子RNA(miRNAs)參與調(diào)控基因表達(dá),但其機(jī)制區(qū)別于siRNA介導(dǎo)的mRNA降解。第一個(gè)被確認(rèn)的miRNA是在線蟲中發(fā)現(xiàn)的lin-4 和let-7,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):RPMI 4788細(xì)胞株)隨后多個(gè)研究小組在包括人類、果蠅、植物等多種生物物種中鑒別出數(shù)百個(gè)miRNAs。
MicroRNA對(duì)于植物的胚芽發(fā)育有重要的影響,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):FL細(xì)胞株)這種影響主要是通過減少調(diào)節(jié)基因表達(dá)的蛋白的表達(dá),而在脊椎動(dòng)物中,microRNA的這一作用并不明顯。
但是研究小組發(fā)現(xiàn)的驚人結(jié)果揭示了在小鼠胚胎中miRNAs對(duì)心臟發(fā)育的意義。(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):L132細(xì)胞株)這一研究說明了miRNAs在心臟基因調(diào)控上、下游中的作用,也為理解器官在形成時(shí)的調(diào)控奠定了良好的基礎(chǔ)。