細(xì)胞：Psi2 DAP細(xì)胞

中文名稱：小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁

培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí)）。

Psi2 DAP細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時(shí)，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見(jiàn)細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；）

研究創(chuàng)建了一種多能干細(xì)胞基因組編輯平臺(tái)：iCRISPR，這一平臺(tái)能快速，高效的敲除干細(xì)胞中的基因，而且還能在干細(xì)胞分化過(guò)程中，進(jìn)行階段特異性的基因敲除，這將在人類疾病復(fù)雜病理研究中大放異彩。

（人CAL-78細(xì)胞 來(lái)源：通派細(xì)胞庫(kù) 人軟骨肉瘤細(xì)胞）

人體多能干細(xì)胞(hPSCs)不僅能被用于臨床的再生研究應(yīng)用中，而且也能作為解析復(fù)雜性狀和特征的平臺(tái)，闡明其背后的基因和分子途徑。開(kāi)發(fā)多種遺傳操控方法，但是這些方法依然存在各種問(wèn)題，需要快速，具有可操控性的生物學(xué)手段。

（人RERF-LC-Ad2細(xì)胞 來(lái)源：通派細(xì)胞庫(kù) 人肺腺癌細(xì)胞）

研究利用CRISPR和TALEN，這兩種備受關(guān)注的基因組編輯技術(shù)，研發(fā)出了一種人類多能干細(xì)胞基因組編輯平臺(tái)。研究人員將這一平臺(tái)稱為iCRISPR。

（小鼠Y1細(xì)胞 來(lái)源：通派細(xì)胞庫(kù) 小鼠腎上腺皮質(zhì)瘤細(xì)胞）

iCRISPR能用于基因功能喪失研究中，快速，高效的敲除人體多能干細(xì)胞中的等位基因，也可以針對(duì)一些精確的疾病模型，通過(guò)特定的核苷酸變換，進(jìn)行多能干細(xì)胞純合體敲除。

（人AsPC-1細(xì)胞 來(lái)源：通派細(xì)胞庫(kù) 人胰腺癌細(xì)胞）

通過(guò)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)，研究人員驗(yàn)證了雙重和三重基因敲除hPSC細(xì)胞系一步法的有效性，同時(shí)也證明了在多能干細(xì)胞分化過(guò)程中能進(jìn)行階段特異性誘導(dǎo)基因敲除，這對(duì)于發(fā)育生物學(xué)研究來(lái)說(shuō)意義重大。

（人MPanc-96細(xì)胞 來(lái)源：通派細(xì)胞庫(kù) 人腺腺癌細(xì)胞）

研究指出，iCRISPR平臺(tái)尤其適合用于解析人類疾病研究中的復(fù)雜遺傳相互作用，以及多效性基因功能，這將有助于進(jìn)行人體多能干細(xì)胞高通量遺傳分析。

（人HCT-8細(xì)胞 HRT-18細(xì)胞 來(lái)源：通派細(xì)胞庫(kù) 人回盲腸癌細(xì)胞）

CRISPRi，他們發(fā)現(xiàn)當(dāng)缺失核酸內(nèi)切酶活性的Cas9與一種導(dǎo)向RNA共表達(dá)時(shí)候，會(huì)產(chǎn)生一種DNA識(shí)別復(fù)合物，這種復(fù)合物能特異性干擾轉(zhuǎn)錄延伸，RNA聚合酶結(jié)合，或轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合。

（人SK-N-BE細(xì)胞 來(lái)源：通派細(xì)胞庫(kù) 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞）

由此研發(fā)出這種CRISPRi系統(tǒng)，這一系統(tǒng)能有效抑制大腸桿菌中靶向基因的表達(dá)，并且不會(huì)出現(xiàn)脫靶效應(yīng)。而且利用CRISPRi，還可以同時(shí)抑制多個(gè)靶基因，這種作用也是可逆。研究還證明，該系統(tǒng)也適用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的基因表達(dá)抑制。