細(xì)胞：SK-MEL-28細(xì)胞

中文名稱：人黑色素瘤細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞

培養(yǎng)基：MEM+10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

SK-MEL-28細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時(shí)，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過72小時(shí)）。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；）

古典豬瘟病毒(CSFV)核酸擴(kuò)增檢測(cè) 標(biāo)本采集及保存和運(yùn)輸：

1）適用標(biāo)本類型：豬血清、肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結(jié)等組織標(biāo)本或病毒培養(yǎng)液等。

2）標(biāo)本采集：

豬肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結(jié)等組織：采集可疑病死豬或捕殺病豬疑似組織約1g左右，置入1.5ml潔凈EP管，立即送檢。

血清： 用一次性無菌注射器抽取受檢豬耳靜脈或者前腔靜脈靜脈血2-5ml，靜置斜放待血清析出， 1,0000rpm離心3分鐘，可取上清立即用于測(cè)試；或吸取上部血清(約500µl)轉(zhuǎn)入無菌1.5ml Eppendoff管，立即送檢。

3）保存和運(yùn)輸：上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃。但不能超過6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。

結(jié)果判斷：陰性質(zhì)控品無帶出現(xiàn)(引物帶除外)，CSFV陽性質(zhì)控品出現(xiàn)142bp 擴(kuò)增帶，若被檢樣品出現(xiàn)142bp 擴(kuò)增帶為古典豬瘟病毒(CSFV)陽性，否則為陰性。

【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】

陰性質(zhì)控品：沒有目的條帶，全部陰性。

CSFV陽性質(zhì)控品：出現(xiàn)目的條帶（142bp)。

以上兩個(gè)條件應(yīng)該同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無效。