細胞：RM細胞

中文名稱：大鼠小膠質(zhì)細胞

生長特性：貼壁細胞

培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

RM細胞傳代：

1）：細胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據(jù)實際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。

3）：取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復(fù)1項操作或者凍存。

收到細胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時）。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）

古典豬瘟病毒(CSFV)核酸擴增檢測

實驗?zāi)康模哼m用于檢測豬血清、肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結(jié)等組織標本或病毒培養(yǎng)液中古典豬瘟病毒(CSFV)mRNA，適用于古典豬瘟病毒感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。其檢測結(jié)果僅供參考。

實驗原理：用一對古典豬瘟病毒(CSFV)特異性引物，應(yīng)用Trizol提取RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶作用將RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA，后者在Taq酶作用下，配以SD-Buffer(內(nèi)含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，用RT-PCR體外擴增法對古典豬瘟病毒(CSFV)RNA進行擴增，產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳，溴化乙錠(EB)染色，紫外燈觀察，從而達到快速檢測之目的。

實驗組成：

（RNA提取液B 1管 500μl/管）（CSFV RT MIX 2管 140μl/管）

 （逆轉(zhuǎn)錄酶系 1管 40μl/管）（CSFV -PCR反應(yīng)管 40管 50μl/管）

 （CSFV陽性質(zhì)控品 1管 50μl/管）（陰性質(zhì)控品 1管 500μl/管）（DEPC水 1管 2000μl/管）

備注: RNA提取液A（Trizol reagents）等另行配備。

結(jié)果判斷：陰性質(zhì)控品無帶出現(xiàn)(引物帶除外)，CSFV陽性質(zhì)控品出現(xiàn)142bp 擴增帶，若被檢樣品出現(xiàn)142bp 擴增帶為古典豬瘟病毒(CSFV)陽性，否則為陰性。

【質(zhì)控標準】

陰性質(zhì)控品：沒有目的條帶，全部陰性。

CSFV陽性質(zhì)控品：出現(xiàn)目的條帶（142bp)。

以上兩個條件應(yīng)該同時滿足，否則，此次試驗視為無效。