細胞：HLMVEC細胞

中文名稱：人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞

生長特性：貼壁

培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時）。

HLMVEC細胞傳代：

1）：細胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據(jù)實際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。

3）：取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。

（網(wǎng)絡信息主針對網(wǎng)絡推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）

人類單倍體細胞系——每個細胞均只包含23條染色體的單個副本。為了生成這些細胞，研究人員借助了稱作為CRISPR/Cas9的基因編輯技術。

（人SGC-7901細胞 來源：通派細胞庫 人胃腺癌細胞）

由于缺少第二基因拷貝大大簡化了基因失活，人類近單倍體細胞系成為了遺傳篩查和基因組工程的重要工具。然而，一直以來缺乏人類單倍體細胞系，阻礙了對某些基因的遺傳操控。（人HSF細胞 來源：通派細胞庫 人皮膚成纖維細胞 ）

除15號染色體的一個30兆堿基(megabase)的雜合片段外，人類近單倍體細胞系HAP1包含了所有染色體的單個副本。這一大的片段具有330個基因，被整合到了19號染色體的長臂上。（小鼠P815細胞 來源：通派細胞庫小鼠肥大細胞瘤細胞）

我們的手邊擁有了這種近單倍體細胞系，但它包含的這一15號染色體大片段讓我們感到非常困擾。這一片段達到了最小染色體的一半大小，因此是一個相當大的dna片段。

（人HSC細胞 人肝星狀細胞 來源：通派細胞庫）

希望能夠除去這一添加在19號染色體中的DNA大片段，使得檢測15號染色體上的基因功能變得更加的容易。利用二倍體細胞開展研究，如果你在一個拷貝的基因中導入突變，它的效應可以被另一個拷貝所掩蓋；（HSG細胞 下頜下腺細胞 來源：通派細胞庫）

為了除去這一跨越330個基因，近3000萬個堿基對的遺傳物質(zhì)，研究人員轉而借助了CRISPR/Cas9技術。設計出了一些引物，使得Cas9內(nèi)切核酸酶靶向這一多余片段的任一末端；（HSY細胞 腮腺上皮細胞 來源：通派細胞庫）

隨后篩查了生成的細胞系——大約400個不同的克隆，找到了正確刪除這一片段的細胞系。兩個克隆符合期望的最終產(chǎn)物：生成了沒有額外的15號染色體部分的單倍體細胞系。（人A2780細胞 人卵巢癌細胞 來源：通派細胞庫）

對于那些試圖闡明基因突變對于人類細胞影響的遺傳學家們來說，這些單倍體細胞將很有用處。它還提供了第一個例子將CRISPR/Cas9系統(tǒng)用于這樣大的DNA片段。