細胞：TE-10細胞

中文名稱：人食管癌細胞

生長特性：貼壁

培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時）。

TE-10細胞傳代：

1）：細胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據實際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。

3）：取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當的培養(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。

（網絡信息主針對網絡推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）

犬瘟熱病毒(CDV)核酸擴增檢測

實驗目的：本試劑盒適用于檢測疑似動物(犬) 分泌物、排泄物(鼻汁、唾液、淚液、心包液、胸 水、腹水及尿液)以及血液、腦脊髓液、淋巴結、肝、脾、脊髓等臟器組織犬瘟熱病毒(CDV)mRNA，適用于犬瘟熱病毒(CDV)感染的輔助診斷及流行病學調查。其檢測結果僅供參考。

實驗原理：本試劑盒選取一對犬瘟熱病毒(CDV) 特異性引物和一條特異性熒光探針，采用Trizol提取犬瘟熱病毒(CDV)RNA，經過逆轉錄作用生成cDNA，后者在耐熱DNA聚合酶（Taq酶）作用下，配以FQ-Buffer(內含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，通過PCR-熒光探針法對犬瘟熱病毒(CDV)RNA進行擴增，從而達到實時快速檢測之目的。

實驗組成：

（RNA提取液B 1管 500μl/管） （CDV-RT MIX 2管 140μl/管）（逆轉錄酶系 1管 40μl/管 ）

（Taq酶系 1管 80μl/管 ）（CDV-PCRMIX 1管 960μl/管）（CDV 陽性質控品 1管 50μl/管(107Copies/ml)）

（陰性質控品 1管 500μl/管）（DEPC水 1管 2000μl/管）

備注: RNA提取液A（Trizol reagents）等另行配備。

犬瘟熱病毒(CDV)核酸檢測質控標準：

陰性質控品：全部陰性。沒有曲線增長。

CDV-陽性質控品：陽性質控品的 Ct 值均應小于 35.0。

∣r∣≥0.97（correlation數值介于-0.97~-1之間，correlation數值等同于∣r∣值）。

 以上條件應同時滿足 ，否則，此次試驗視為無效，全部試驗應重新進行。

犬瘟熱病毒(CDV)核酸檢測結果判定：

測定結果的計算：

如果Ct值﹤38，則實驗樣品的CDV RNA含量(基因拷貝數/ml)= Qty-Copies/ml。

如果38﹤Ct值﹤40,為灰區(qū)建議重新檢測，重新檢測若38﹤Ct值﹤40判為陽性，否則為陰性。

如果Ct值=40，則CDV RNA含量（基因拷貝數/ml）﹤1×102Copies/ml (低于檢測下限)。