細胞：Lewis細胞

中文名稱：小鼠肺癌細胞

生長特性：貼壁

培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時）。

Lewis細胞傳代：

1）：細胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據(jù)實際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。

3）：取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復(fù)1項操作或者凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）

從臨床脂肪抽吸術(shù)丟棄脂肪組織中分離獲取脂肪干細胞，體外培養(yǎng)至第2代，流式細胞儀檢測免疫分子HLAI、HLAII的表達。

（人NCI-H69細胞 肺癌細胞）（人NCI-H716細胞 結(jié)直腸腺癌細胞）

1×105個／孔ADSC細胞刺激異體淋巴細胞，觀察細胞增殖情況。結(jié)果脂肪干細胞表達HLAI類分子，但未檢測到HLAII類分子陽性表達。

（人NCI-H929細胞 白血病細胞）（人OV-1063細胞 卵巢上皮細胞癌細胞）

人IFN-γ刺激48h后，HLAI表達未見明顯增高，HLAII類分子表達明顯增高。異體或經(jīng)IFN-γ作用的脂肪干細胞均未能刺激淋巴細胞體外增殖。

（人OVCAR-3細胞 卵巢腺癌細胞）（人143TK細胞 胸腺激酶缺陷型細胞）

脂肪干細胞可明顯抑制PHA刺激的淋巴細胞增殖，IL-2可逆轉(zhuǎn)脂肪干細胞的抑制作用。脂肪干細胞可明顯抑制雙相混合淋巴細胞反應(yīng)，抑制作用呈脂肪干細胞細胞數(shù)量依賴性；經(jīng)IFN—γ作用后抑制作用未見明顯減弱。

（小鼠B16-F1細胞 黑色素瘤細胞）（人CA46細胞 淋巴瘤細胞）

結(jié)論ADSC可在體外抑制淋巴細胞增殖反應(yīng)，具有一定的調(diào)節(jié)淋巴細胞反應(yīng)的能力，有可能成為組織工程或細胞治療中同種異體細胞來源。