細(xì)胞：T24細(xì)胞

中文名稱(chēng)：人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁

培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí)）。

T24細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時(shí)，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。

2）：鏡下觀(guān)察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見(jiàn)細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀(guān)察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢(xún)細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢(xún)細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；）

RNAi在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中通常用于阻斷特定基因的表達(dá)從而研究基因的功能，常見(jiàn)的做法是將靶向特定基因的大約21堿基長(zhǎng)短的雙鏈sirnas(small interfering RNAs)，或者是45—50-mer的發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA（small hairpin RNA, shRNA）轉(zhuǎn)染到細(xì)胞。

（人DU4475細(xì)胞 乳上皮細(xì)胞）（人EB-3細(xì)胞 伯基特淋巴瘤細(xì)胞）

shRNA在細(xì)胞內(nèi)會(huì)自動(dòng)被加工成為siRNA，從而引發(fā)基因沉默或者表達(dá)抑制?，F(xiàn)在有多個(gè)報(bào)道說(shuō)通過(guò)質(zhì)粒表達(dá)siRNAs同樣可以抑制特定基因的表達(dá)。

（人H1HeLa細(xì)胞 宮頸細(xì)胞）（人HS 683細(xì)胞 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞）

盡管細(xì)節(jié)各有不同，但載體大都是用PolIII啟動(dòng)子啟動(dòng)編碼shRNA(small hairpin RNA)的序列。選用PolIII啟動(dòng)子的原因在于這個(gè)啟動(dòng)子總是在離啟動(dòng)子一個(gè)固定距離的位置開(kāi)始轉(zhuǎn)錄合成RNA，遇到4—5個(gè)連續(xù)的U即終止，非常精確。

（人J82細(xì)胞 膀胱癌細(xì)胞）（人Jurkat細(xì)胞 白血病細(xì)胞）

當(dāng)這種帶有PolIII 啟動(dòng)子和shRNA編碼序列的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，這種能表達(dá)siRNA的質(zhì)粒確實(shí)能夠下調(diào)特定基因的表達(dá)，抑制范圍包括外源基因和內(nèi)源基因。

（人JurkatE6-1細(xì)胞 白血病細(xì)胞）（人MDA-MB-175Ⅶ細(xì)胞 乳導(dǎo)管癌細(xì)胞）

采用這種方法的優(yōu)點(diǎn)在于，通過(guò)siRNA表達(dá)質(zhì)粒的選擇標(biāo)記，siRNA載體能夠更長(zhǎng)時(shí)間地抑制目的基因表達(dá)。