細(xì)胞：HIT-T15細(xì)胞

中文名稱：倉(cāng)鼠beta胰島β細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁

培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí)）。

HIT-T15細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時(shí)，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見(jiàn)細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；）

鼻疽假單胞菌(BM)核酸擴(kuò)增檢測(cè)：

DNA提取

標(biāo)本預(yù)處理：

1：外周血淋巴細(xì)胞分離 (用戶亦可用淋巴細(xì)胞分離液分離淋巴細(xì)胞)將抗凝血搖勻，取500μl轉(zhuǎn)至一潔凈的1.5ml 離心管中，編號(hào)標(biāo)記。

2：加入1ml 1×紅細(xì)胞裂解液(RCLB,試劑盒配備10×RCLB，使用前請(qǐng)用雙蒸餾水按1：9比例配制成1×RCLB)，劇烈震蕩30s，3,000g離心5min，棄上清。

3：重復(fù) 1.2  兩至三次至無(wú)明顯紅色沉淀。(若沉淀明顯，請(qǐng)?jiān)僦貜?fù)步驟1.2 一次)。

4：加入1ml生理鹽水，劇烈震蕩15s，10000g離心5min，棄上清。

5：肺臟、皮膚及腸系膜淋巴結(jié)等固體組織：取適量(500mg)固體組織，用生理鹽水洗凈表面殘余血液，轉(zhuǎn)至研磨器中，加1ml生理鹽水，研磨成組織勻漿，取50μl組織勻漿轉(zhuǎn)至1.5ml潔凈的離心管中。

6：呼吸道或皮膚分泌物：充分混勻上述標(biāo)本，取1ml試子液轉(zhuǎn)至一潔凈的1.5ml離心管中，13,000g離心1min，棄上清，沉淀加1ml生理鹽水，充分混勻，13,000g離心1min，棄上清。

7：DNA提?。合蛏鲜鰳?biāo)本中加50μl核酸提取液B（內(nèi)含不溶物質(zhì)，用前需室溫溶解并充分混勻），充分混勻，100℃裂解10min，4℃13,000g離心3min，取上清液4μl做PCR擴(kuò)增。

陰性質(zhì)控品：取50μl陰性質(zhì)控品，加50μl核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液4μl做PCR反應(yīng)。

BM陽(yáng)性質(zhì)控品：直接取4μl進(jìn)行PCR擴(kuò)增，或按照PCR擴(kuò)增介紹方法進(jìn)行定量分析。