細胞：HIEC細胞

中文名稱：正常人腸上皮細胞

生長特性：貼壁

培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時）。

HIEC細胞傳代：

1）：細胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據(jù)實際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。

3）：取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。

（網絡信息主針對網絡推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）

鼻疽假單胞菌(BM)核酸擴增檢測標本采集：

適用標本類型：人或動物(馬、騾、驢等)血液、呼吸道分泌物、皮膚潰瘍分泌物及疑似動物肺臟及腸系膜淋巴結等組織。

標本采集

全血：無菌條件下用注射器取人或動物靜脈血2-3ml，轉至一含有枸櫞酸na或Na2EDTA的抗凝管中，輕輕顛倒數(shù)次混勻，立即送檢。

呼吸道或皮膚分泌物：無菌條件下用棉試子取疑似患者呼吸道深部或皮膚潰瘍分泌物，轉至一含有2-3ml生理鹽水的5ml離心管中，密閉送檢。

肺臟、淋巴結或皮膚組織：無菌條件下取疑似動物肺臟、淋巴結或皮膚組織1g，轉至一潔凈的1.5ml離心管中，密閉送檢。

標本保存：上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過6個月，標本運送應采用0℃冰壺。

實驗儀器：主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛細管的儀器，MJ Opticon系列或取得資格認證的定量PCR儀。質控標準：

陰性質控品：全部陰性。

BM陽性質控品：陽性質控品的 Ct 值均應小于 35.0。

∣r∣≥0.97（correlation數(shù)值介于-0.97~-1之間，correlation數(shù)值等同于∣r∣值）。

 以上條件應同時滿足 ，否則，此次試驗視為無效，全部試驗應重新進行。