細(xì)胞：HA1800細(xì)胞

中文名稱：人正常星形膠質(zhì)細(xì)胞

生長特性：貼壁

培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長不宜超過72小時(shí)）。

HA1800細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時(shí)，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；）

巴貝斯蟲(BBS)核酸檢測：

標(biāo)本采集、保存與運(yùn)輸

適用標(biāo)本：疑似動(dòng)物(牛)全血紅細(xì)胞。

標(biāo)本采集：全血：無菌注射器抽取待檢者靜脈血2ml，置于Na2EDTA或枸櫞酸na抗凝管中，充分混勻，密閉送檢。

實(shí)驗(yàn)標(biāo)本保存：上述標(biāo)本應(yīng)立即送檢，標(biāo)本運(yùn)送請(qǐng)用冰壺。

實(shí)驗(yàn)方法：

DNA提?。?/p>

全血標(biāo)本預(yù)處理（按下述步驟操作，用戶也可用淋巴細(xì)胞分離液分離淋巴細(xì)胞）。

1：將抗凝血搖勻，取500μl轉(zhuǎn)至一潔凈的1.5ml 離心管中，編號(hào)標(biāo)記。

2：加入1ml 1×紅細(xì)胞裂解液(RCLB,試劑盒配備10×RCLB，使用前請(qǐng)用雙蒸餾水按1：9比例配制成1×RCLB)，劇烈震蕩30s，10,000g離心5min，棄上清。

3：重復(fù) 1.1.2  兩至三次至無明顯紅色沉淀。

4：加入1ml生理鹽水，劇烈震蕩15s，13,000g離心3min，棄上清。

陰性質(zhì)控品：取50μl陰性質(zhì)控品，加50μl核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液4μl做PCR反應(yīng)。

BBS陽性質(zhì)控品：直接取4μl進(jìn)行PCR擴(kuò)增，或按照PCR擴(kuò)增介紹方法進(jìn)行定量分析。