HBdSF細胞傳代培養(yǎng)（人淋巴管內皮細胞）

時間：2024/1/17閱讀：391

細胞：HBdSF細胞

中文名稱：人淋巴管內皮細胞

生長特性：貼壁

培養(yǎng)基：ECM

凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

HBdSF細胞傳代：

1）：細胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據(jù)實際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。

3）：取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。

（網(wǎng)絡信息主針對網(wǎng)絡推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）

基因分型(AIV)核酸檢測RNA提取

樣品處理固體組織：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿或剪刀剪碎，加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents），研磨或振蕩至勻漿狀，轉移到1.5ml的EP管中，室溫放置5min。

樣品處理培養(yǎng)物、試子等液體標本：取100μl血清或病毒液加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents）充分震蕩，室溫放置5min。

2):加入100μl氯仿，用力震蕩15s，室溫靜置5min,4℃ 13,000rpm離心5min。

3):小心將上層水相轉移到干凈離心管中，加300μl 無水乙醇，另加10μl RNA提取液B（內含不溶物，使用前室溫溶解并充分混勻），充分混勻，13,000rpm離心1min。

4):棄上清，加入500 μl 75%的DEPC乙醇，充分混勻，13,000rpm離心1min，小心吸去大部分乙醇。

5):將提取管敞口在室溫空氣中干燥5min待乙醇揮發(fā)干凈，用20μl DEPC H2O溶解沉淀。

陰性質控品：取100μl陰性質控品加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents）充分震蕩，室溫放置5min。后按1.2~1.5操作。

AIV-陽性質控品（包括U、H5、H7、H9）：分別直接取3μl進行PCR擴增。

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