Western Blot常見問題分析

SDS-PAGE電泳：
1、膠不平？凝膠漏液？
a:膠板洗刷干凈
b:加入APS和TEMED的量要合適
c:加入試劑后搖勻，使其充分混合，防止部分膠塊聚合不均勻
d:溫度合適，受熱不均勻?qū)е履z聚合不均勻
e:兩塊玻璃板底部要對齊

F9細(xì)胞 小鼠畸胎瘤細(xì)胞
FaDu細(xì)胞人咽鱗癌細(xì)胞
FO細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞
FRhK-4細(xì)胞 恒河猴胚腎細(xì)胞
GBC-SD細(xì)胞 人膽囊癌細(xì)胞

2、條帶比正常的窄？“微笑”或“倒微笑”條帶？
a:凝膠聚合不均勻，灌膠時候盡量混合均勻，動作輕緩
b:拔梳子要迅速，清洗加樣孔要小心，以免把上樣帶扭曲
c:樣品鹽濃度過高會擠壓其他條帶導(dǎo)致寬窄不一，純化樣品，調(diào)整鹽濃度
d:膠板底部有氣泡會影響電泳效果，應(yīng)趕走氣泡。同時注意電泳槽裝置是否合適

EA.hy926細(xì)胞 人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞
EBTr （NBL-4）細(xì)胞 牛胚氣管細(xì)胞
Eca-109細(xì)胞 人食管癌細(xì)胞
EL4細(xì)胞 小鼠淋巴瘤細(xì)胞
EL4.IL-2細(xì)胞 小鼠淋巴瘤細(xì)胞
ES-2細(xì)胞人卵巢透明細(xì)胞癌
F81細(xì)胞貓腎細(xì)胞

轉(zhuǎn)膜及抗體檢測：
1、凝膠腫脹或卷曲？條帶歪斜或漂移？單個或多個白點？轉(zhuǎn)膜緩沖液過熱？ 
?可將凝膠在轉(zhuǎn)膜之前放到轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡5-10min
?電轉(zhuǎn)儀長期使用導(dǎo)致海綿變薄，“三明治”結(jié)構(gòu)不緊湊導(dǎo)致?？稍趦蓧K海綿之間墊上少許普通的草紙
?確保膜和膠塊之間沒有氣泡
?緩沖液中離子濃度太低，電流或電壓太高。轉(zhuǎn)膜過程注意降溫

背景太高
原因：
1、膜沒有均勻浸濕         
2、膜或者緩沖液污染
3、封閉不充分             
4、抗體與封閉劑出現(xiàn)交叉反應(yīng)
5、抗體濃度過高

對策：
1.轉(zhuǎn)膜前用100%甲醇將膜*浸濕
2.拿取膜與吸水紙時要戴手套，更換新鮮轉(zhuǎn)膜緩沖液
3.檢測一抗、二抗與封閉劑是否有交叉反應(yīng)
4.雜交前檢測一抗、二抗的工作濃度

Calu-6細(xì)胞 人退行性癌細(xì)胞
CBRH-7919細(xì)胞 大鼠肝癌細(xì)胞
CCD-1095Sk細(xì)胞人乳腺浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞
CEM/C1細(xì)胞 人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
CFPAC-1細(xì)胞 人胰腺癌細(xì)胞
CGM1細(xì)胞 人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞
Chang liver細(xì)胞 人張氏肝細(xì)胞
CHL細(xì)胞倉鼠肺細(xì)胞
CNE細(xì)胞 人鼻咽癌細(xì)胞
COLO 205細(xì)胞人結(jié)腸癌細(xì)胞
COLO 320DM細(xì)胞 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
COLO-320細(xì)胞 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
COS-1細(xì)胞 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞
COS-7細(xì)胞 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞
CRFK細(xì)胞貓腎細(xì)胞
CT26.WT細(xì)胞小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞
CTLA4 Ig-24細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞
CTLL-2細(xì)胞 小鼠T細(xì)胞
CW-2細(xì)胞 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
Dami細(xì)胞人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞
Daudi細(xì)胞 人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞
DH82細(xì)胞 狗腎惡性組織細(xì)胞增生癥細(xì)胞
DLD-1細(xì)胞 人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞
DU 145細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞
 

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