Southern Blot原理及實(shí)驗(yàn)方法 SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1.SDS與蛋白質(zhì)的結(jié)合按質(zhì)量成比例(即:1.4gSDS/g蛋白質(zhì)),蛋白質(zhì)含量不可以超標(biāo),否則SDS結(jié)合量不足。
2. 用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子量時(shí),必須同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。不能利用這次的標(biāo)準(zhǔn)曲線作為下次用。并且SDS-PAGE測(cè)定分子量有10%誤差,不可*信任。
Calu-6細(xì)胞 人退行性癌細(xì)胞
CBRH-7919細(xì)胞 大鼠肝癌細(xì)胞
CCD-1095Sk細(xì)胞人乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞
CEM/C1細(xì)胞 人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
CFPAC-1細(xì)胞 人胰腺癌細(xì)胞
CGM1細(xì)胞 人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞
3. 有些蛋白質(zhì)由亞基(如血紅蛋白)或兩條以上肽鏈(α-胰凝乳蛋白酶)組成的,它們?cè)趲€基乙醇和SDS的作用下解離成亞基或多條單肽鏈。因此,對(duì)于這一類(lèi)蛋白質(zhì),SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定的只是它們的亞基或是單條肽鏈的相對(duì)分子量。
4. 有的蛋白質(zhì)(如:電荷異?;蚪Y(jié)構(gòu)異常的蛋白質(zhì);帶有較大輔基的蛋白質(zhì))不能采用該法測(cè)相對(duì)分子量。
Chang liver細(xì)胞 人張氏肝細(xì)胞
CHL細(xì)胞倉(cāng)鼠肺細(xì)胞
CNE細(xì)胞 人鼻咽癌細(xì)胞
COLO 205細(xì)胞人結(jié)腸癌細(xì)胞
COLO 320DM細(xì)胞 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
COLO-320細(xì)胞 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
5. 如果該電泳中出現(xiàn)拖尾、染色帶的背景不清晰等現(xiàn)象,可能是SDS不純引起。
印跡法:是指將樣品轉(zhuǎn)移到固相載體上,而后利用相應(yīng)的探測(cè)反應(yīng)來(lái)檢測(cè)樣品的一種方法。
1975年,Southern建立了將DNA轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(NC膜)上,并利用DNA-RNA雜交檢測(cè)特定的DNA片段的方法,稱(chēng)為Southern印跡法。
而后人們用類(lèi)似的方法,對(duì)RNA和蛋白質(zhì)進(jìn)行印跡分析,對(duì)RNA的印跡分析稱(chēng)為Northern印跡法,對(duì)單向電泳后的蛋白質(zhì)分子的印跡分析稱(chēng)為Western印跡法,對(duì)雙向電泳后蛋白質(zhì)分子的印跡分析稱(chēng)為Eastern印跡法
Western Blot基本原理:在電場(chǎng)的作用下將電泳分離的多肽從凝膠轉(zhuǎn)移至一種固相支持體,然后用這種多肽的特異抗體來(lái)檢測(cè).
COS-1細(xì)胞 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞
COS-7細(xì)胞 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞
CRFK細(xì)胞貓腎細(xì)胞
CT26.WT細(xì)胞小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞
CTLA4 Ig-24細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞
CTLL-2細(xì)胞 小鼠T細(xì)胞
SDS-PAGE原理:SDS 是一種離子性的界面活性劑,它有強(qiáng)離子性的硫酸根離子也帶有疏水性的長(zhǎng)碳鏈.當(dāng) SDS 與蛋白質(zhì)混合時(shí),它會(huì)以其碳鏈與蛋白質(zhì)之疏水性胺基酸結(jié)合將蛋白質(zhì)包起來(lái),而以硫酸根離子外露與水分子作用.大多數(shù)蛋白質(zhì)和 SDS 的平均結(jié)合量是 1:1.4 (以重量為單位),而蛋白質(zhì)結(jié)合固定比例之 SDS 後,由於 SDS 帶強(qiáng)負(fù)價(jià),使蛋白質(zhì)原先的帶電價(jià)微不足道,且每單位重量之蛋白質(zhì)帶電價(jià)一致(charge density),所以決定不同蛋白的泳動(dòng)速率就只剩下分子大小一項(xiàng)因素
CW-2細(xì)胞 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
Dami細(xì)胞人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞
Daudi細(xì)胞 人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞
DH82細(xì)胞 狗腎惡性組織細(xì)胞增生癥細(xì)胞
DLD-1細(xì)胞 人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞
DU 145細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞
EA.hy926細(xì)胞 人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞
EBTr (NBL-4)細(xì)胞 牛胚氣管細(xì)胞
Eca-109細(xì)胞 人食管癌細(xì)胞
EL4細(xì)胞 小鼠淋巴瘤細(xì)胞
EL4.IL-2細(xì)胞 小鼠淋巴瘤細(xì)胞
ES-2細(xì)胞人卵巢透明細(xì)胞癌
F81細(xì)胞貓腎細(xì)胞
F9細(xì)胞 小鼠畸胎瘤細(xì)胞
FaDu細(xì)胞人咽鱗癌細(xì)胞
FO細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞
FRhK-4細(xì)胞 恒河猴胚腎細(xì)胞
GBC-SD細(xì)胞 人膽囊癌細(xì)胞
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