Southern Blot原理及實(shí)驗(yàn)方法:

原理:將待檢測(cè)的DNA分子用/不用限制性內(nèi)切酶消化后，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標(biāo)記物標(biāo)記的DNA或RNA探針進(jìn)行反應(yīng)。
如果待檢物中含有與探針互補(bǔ)的序列，則二者通過(guò)堿基互補(bǔ)的原理進(jìn)行結(jié)合，游離探針洗滌后用自顯影或其它合適的技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，從而顯示出待檢的片段及其相對(duì)大小。  
用途：檢測(cè)樣品中的DNA及其含量，了解基因的狀態(tài), 如是否有點(diǎn)突變、擴(kuò)增重排等。

人肺腺癌細(xì)胞，NCI-H1395細(xì)胞（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H358細(xì)胞（T25培養(yǎng)瓶@密度75%
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，HCC827細(xì)胞（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人典型小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H1688細(xì)胞（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H1299細(xì)胞（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人胚肺二倍體細(xì)胞，2BS細(xì)胞（T25培養(yǎng)瓶@密度75%） 
人支氣管上皮樣細(xì)胞，BEAS-2B細(xì)胞
人乳腺癌細(xì)胞，Hs 578T細(xì)胞  
人乳腺癌細(xì)胞，MDA-MB-468-06細(xì)胞 
 2BS細(xì)胞 二倍體細(xì)胞 
試劑和器材
一、試劑
變性液：1.5mol/L NaCl，0.5mol/L NaOH。
中和液：0.5mol/L Tris-HCl (pH=7.0)，1.5mol/L NaCl。
20×SSC：3mol/L NaCl，0.3mol/L 檸檬酸鈉。
以上溶液均在100Kpa滅菌20分鐘。
2×SSC：用無(wú)菌移液管吸取20×SSC溶液5mL，加無(wú)菌水45mL。
6×SSC：用無(wú)菌移液管吸取20×SSC溶液15mL，加無(wú)菌水75mL。

二、器材   22cm×15cm瓷盤(pán)

操作方法:
1. 在瓊脂糖凝膠上電泳分離DNA。取出凝膠，切去邊緣多于部分，EB染色，在紫外燈下照相（放一標(biāo)尺，可從像片中讀出DNA遷移的距離）。
2. 將凝膠置于200mL變性液中，浸泡45分鐘，并溫和地不斷振蕩，使凝膠上的ds-DNA轉(zhuǎn)變?yōu)閟s-DNA，然后用重蒸水沖洗凝膠幾次。
3. 用中和液浸泡凝膠并不斷地振蕩45分鐘，將凝膠中和至中性。防止凝膠的堿性破壞硝酸纖維膜。
4. 取一個(gè)瓷盤(pán)，在底部放一塊玻璃板（或一塊海綿）使盛器內(nèi)的20倍SSC轉(zhuǎn)移濾液低于玻板表面，在玻板表面蓋一張3mm的二號(hào)濾紙，濾紙兩邊浸沒(méi)于20倍SSC溶液中，在玻璃和濾紙之間，趕掉所有的氣泡。
5. 把凝膠底面朝上放在濾紙上，趕走兩層之間出現(xiàn)的氣泡。
6. 裁剪一張硝酸纖維膜，其長(zhǎng)與寬大于凝膠1—2mm，并在角上作記號(hào)，以確定濾膜方位。先把它放在去離子水中潤(rùn)濕后，再放在20倍SSC溶液中潤(rùn)濕5分鐘，然后放在凝膠表面，兩層之間不可有氣泡。
7. 然后再把兩張與濾膜一樣大小的二號(hào)濾紙，在2倍SSC溶液中浸濕，覆蓋在硝酸纖維膜上，同樣要把氣泡趕走。
8. 把一疊吸水紙（或衛(wèi)生紙，約有5—8cm高，略小于濾紙），放置在濾紙上，在吸水紙上再放一塊玻璃板和重約500g的重物，放置過(guò)夜。
9.轉(zhuǎn)移結(jié)束后，移去上面的吸水紙和濾紙，同時(shí)翻轉(zhuǎn)取出凝膠與硝酸纖維膜，把凝膠的點(diǎn)樣與硝酸纖維膜的相對(duì)應(yīng)位置用鉛筆或解剖針的針尖做好標(biāo)記。
11. 把已轉(zhuǎn)移了DNA的硝酸纖維膜放在6倍SSC溶液中振蕩浸泡5分鐘，然后放在濾紙上吸干溶液。再把它夾在兩層濾紙之間，80℃真空干燥2小時(shí)。

人肺腺癌細(xì)胞 SPC-A1細(xì)胞 規(guī)格（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人肺癌細(xì)胞 A549細(xì)胞 規(guī)格（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 H125細(xì)胞 規(guī)格（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人肺癌細(xì)胞 H1299細(xì)胞 規(guī)格（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人肺癌細(xì)胞 TKB-1細(xì)胞 規(guī)格（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人肺腺癌細(xì)胞，LTEP-a-2細(xì)胞 規(guī)格（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人肺腺癌細(xì)胞，Lu-165細(xì)胞 規(guī)格（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H460細(xì)胞 規(guī)格（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人肺腺癌細(xì)胞，SPC-A-1細(xì)胞 規(guī)格（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞，095-D細(xì)胞（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人肺鱗癌細(xì)胞，SK-MES-1細(xì)胞（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H661細(xì)胞（T25培養(yǎng)瓶@密度75%）
人肺黏液上皮樣癌細(xì)胞，NCI-H292細(xì)胞 
人肺退行性癌細(xì)胞，Calu-6細(xì)胞（T25培養(yǎng)瓶@密度75%） 

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