人肺癌細(xì)胞 A-427細(xì)胞 豬瘟病毒核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒
使用方法:
1.DNA提取
1.1樣品處理
血清或病毒液：取液體標(biāo)本約50μl，轉(zhuǎn)至1.5ml潔凈離心管中，加50μl核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液3μl進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結(jié)等固體組織：取約200mg固體組織，用生理鹽水洗凈表面殘余血液，轉(zhuǎn)至研磨器中，加1ml生理鹽水，研磨成組織勻漿，取50μl組織勻漿液轉(zhuǎn)至1.5ml潔凈的離心管中，加50μl核酸提取液B（內(nèi)含不溶物質(zhì)，用前需室溫溶解并充分混勻），充分混勻，100℃裂解10min，4℃13,000g離心3min，取上清液3μl進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
陰性質(zhì)控品：取50μl陰性質(zhì)控品，加50μl核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液3μl進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
ASFV陽(yáng)性質(zhì)控品：直接取4μl進(jìn)行PCR擴(kuò)增?；虬凑誔CR擴(kuò)增介紹方法進(jìn)行定量分析。
2．PCR擴(kuò)增
從試劑盒中取出ASFV–PCR MIX、Taq酶系，室溫融化并振蕩混勻后，10,000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N（N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+4管陽(yáng)性對(duì)照），每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
人肺癌細(xì)胞 A-427細(xì)胞 試劑 ASFV–PCR MIX Taq酶系
用量 24μl 2μl
豬瘟病毒(ASFV)核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒 適用于檢測(cè)豬血清、肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結(jié)等組織標(biāo)本或病毒培養(yǎng)液中非洲豬瘟病毒(ASFV)DNA，適用于豬瘟病毒感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
試劑盒用一對(duì)非洲豬瘟病毒(ASFV)特異性引物和一條特異性熒光探針，應(yīng)用堿裂解法裂解提取DNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(內(nèi)含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，通過(guò)PCR-熒光探針?lè)▽?duì)非洲豬瘟病毒(ASFV)DNA進(jìn)行擴(kuò)增，從而達(dá)到實(shí)時(shí)快速定量檢測(cè)之目的。
人肺癌細(xì)胞 A-427細(xì)胞 適用標(biāo)本類型：豬血清、肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結(jié)等組織標(biāo)本或病毒培養(yǎng)液等。
標(biāo)本采集:
豬肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結(jié)等組織：采集可疑病死豬或捕殺病豬疑似組織約1g左右，置入1.5ml潔凈EP管，立即送檢。
血清:用一次性無(wú)菌注射器抽取受檢豬耳靜脈或者前腔靜脈靜脈血2-5ml，靜置斜放待血清析出， 1,0000rpm離心3分鐘，可取上清立即用于測(cè)試；或吸取上部血清(約500μl)轉(zhuǎn)入無(wú)菌1.5ml Eppendoff管，立即送檢。
計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10,000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入26μl，向每管中加入處理后樣品(所獲得的逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物)或陰性質(zhì)控品、ASFV陽(yáng)性定量標(biāo)準(zhǔn)品(使用前用陰性質(zhì)控品梯度稀釋10倍、100倍、1000倍，記為1×10P6PCopies/ml，1×10P5PCopies/ml，1×10P4PCopies/ml)和陰性質(zhì)控品4μl，10,000rpm瞬時(shí)離心30秒。將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)，按對(duì)應(yīng)順序設(shè)置陰性控品，陽(yáng)性質(zhì)控品以及未知標(biāo)本，并設(shè)置反應(yīng)體積(30μl)、樣品名稱、標(biāo)記熒光基團(tuán)種類(報(bào)告基團(tuán)為FAM，淬滅基團(tuán)為TAMRA)和循環(huán)條件：
ABI PRISM 7700，ABI PRISM5700，ABI GeneAmp 7000 (需要剪掉反應(yīng)蓋)，ABI PRISM7300/7500(使用8聯(lián)管)，MJ Opticon(使用8聯(lián)管)等使用薄壁管的儀器，循環(huán)條件：94℃→2分鐘，后93℃ 30秒→55℃ 45秒，共40個(gè)循環(huán)。
LightCycler等使用毛細(xì)管的儀器，循環(huán)條件：94℃→2分鐘，后93℃ 5秒→56℃ 45秒，共40個(gè)循環(huán)。
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公司細(xì)胞特點(diǎn)：到貨時(shí)間快，狀態(tài)穩(wěn)定，的售后服務(wù)，提供長(zhǎng)期的技術(shù)咨詢服務(wù)！公司提供復(fù)蘇細(xì)胞，凍存細(xì)胞，耐藥細(xì)胞，細(xì)胞染色等服務(wù)，提供細(xì)胞說(shuō)明書，鑒定報(bào)告。細(xì)胞售出規(guī)定時(shí)間內(nèi)提供售后。細(xì)胞庫(kù)始終秉持誠(chéng)實(shí)守信、非盈利為目的地爭(zhēng)取努力做到快速、效率、及時(shí)、地完善產(chǎn)品服務(wù)，滿足客戶們的多類需求。
