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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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關(guān)于RNA提取時(shí)RNA降解的原因!

時(shí)間:2022-10-31閱讀:383
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  1 ) 新鮮細(xì)胞:

  裂解液的量不足,使得裂解不充分。

  2 ) 新鮮組織:

  某些含有內(nèi)源性核酸酶的樣品,很難避免RNA酶的降解,建議采用的方法為在液氮條件下將組織研碎,并且,勻漿時(shí)采用更多的裂解液。

  3 ) 冷凍樣品:

  樣品取材后應(yīng)該迅速置于液氮中冷凍存放,然后轉(zhuǎn)移到-70℃冰箱存放。如果未經(jīng)液氮速冷直接轉(zhuǎn)移到-70℃冰箱存放,會(huì)造成RNA緩慢降解。樣品研磨后,在液氮?jiǎng)倓倱]發(fā)完時(shí),將樣品迅速轉(zhuǎn)移到含裂解液的容器中,立即混勻勻漿。

  4 ) 外源 RNA 酶的污染:

  試劑、器械等實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)該采用DEPC 水滅菌處理。

  5 ) 內(nèi)源 RNA 酶的污染:

  抑制劑失效或者用量不夠,實(shí)驗(yàn)樣品過(guò)多或者勻漿溫度過(guò)高。

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