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當(dāng)前位置:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司>>公司動(dòng)態(tài)>>使用分光光度計(jì)測(cè)定蔗糖含量
實(shí)驗(yàn)過(guò)程
進(jìn)行測(cè)試時(shí),作為對(duì)照品的蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品和相應(yīng)的空白必須根據(jù)試劑盒制造商的要求在標(biāo)準(zhǔn)1cm石英比色皿中制備,此次實(shí)驗(yàn)使用的是遠(yuǎn)慕生物試劑盒,如下表所示。
比色皿 | 蔗糖分析試劑[mL] | 樣品量[mL] | 水[mL] |
蔗糖分析試劑空白 | 0.1 | - | 0.1 |
葡萄糖分析試劑空白 | - | - | 0.2 |
對(duì)照品空白 | - | 0.1 | 0.1 |
對(duì)照品測(cè)試 | 0.1 | 0.1 | - |
樣品空白 | - | 0.1 | 0.1 |
樣品測(cè)試 | 0.1 | 0.1 | - |
將每個(gè)比色皿中物質(zhì)混合均勻并在室溫靜置10分鐘。然后將2.0 mL葡萄糖分析試劑加入到每個(gè)比色皿中,混合均勻并在室溫再靜置15分鐘。
如果儀器配備了自動(dòng)多聯(lián)池,可以一次加載所有的空白、對(duì)照品和樣品,使得測(cè)量流程變得更便利。
通過(guò)下面公式計(jì)算得到蔗糖濃度。首先計(jì)算總空白,它包括了樣品和試劑的吸光度:
A(總空白)=A(樣品/對(duì)照品空白)+A(蔗糖分析試劑空白)-A(葡萄糖分析試劑空白)
對(duì)于樣品和對(duì)照品,因生成NADH產(chǎn)生的吸光度差值可如下計(jì)算:
ΔA=A樣品/對(duì)照品測(cè)試-A總空白
現(xiàn)在就可以計(jì)算得到蔗糖濃度了:
(ε:蔗糖的吸光系數(shù),d:光程)
總結(jié):蔗糖含量可以很容易的使用酶試劑盒和紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)量。酶分析強(qiáng)大之處在于高專一性和靈敏性,可以分辨蔗糖和其它糖分子如葡萄糖和果糖。酶分析可以廣泛用于飲料和其它食品。
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