產(chǎn)品名稱：人抗生長(zhǎng)激素抗體(GHAb)ELISA試劑盒

檢測(cè)方法：雙抗夾心法/酶聯(lián)免疫方法

規(guī)格：96T/48T

反應(yīng)時(shí)間：3.5h

反應(yīng)性：Human

樣本體積：100μL

檢測(cè)范圍：25 pg/ml – 800 pg/ml。

特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

有效期：6個(gè)月

保存條件：2-8℃

可檢測(cè)多種生物樣品，包括：血清、血漿、體液如尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和細(xì)胞/組織裂解液等。

本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人抗生長(zhǎng)激素抗體(GHAb)的含量。

【實(shí)驗(yàn)原理】  

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人GHAb抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人GHAb會(huì)與包被抗體結(jié)合。依次加入生wu素化的抗人GHAb抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素?？谷薌HAb抗體與結(jié)合在包被抗體上的人GHAb結(jié)合、生wu素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，GHAb濃度與OD450值之間呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中GHAb的濃度。


【樣本處理及要求】  

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測(cè)。

5.其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)。

6.樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

7.樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于2-8℃，若不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè))，或-80℃（6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)），避免反復(fù)凍融。

8.如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù)）。

樣品稀釋指導(dǎo)：

用戶須估計(jì)樣品待測(cè)因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測(cè)因子的濃度處于ELISA試劑盒的最佳檢測(cè)范圍。

為避免樣本中基質(zhì)效應(yīng)的影響，建議樣本最少稀釋一倍。

以上方案僅供參考，樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄。

注：標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

【注意事項(xiàng)】  

1．為確保試驗(yàn)結(jié)果的有效性，建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。

2．酶標(biāo)板袋拆封后，盡快將不用的板孔放回，并放入干燥劑，保持酶標(biāo)板干燥。

3．用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將試劑盒平衡至室溫，各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。

4，TMB避光保存。

5，洗板過(guò)程非常重要，不充分的洗板易導(dǎo)致假陽(yáng)性。

6．建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測(cè)。

7．請(qǐng)保持試驗(yàn)過(guò)程的連續(xù)性，禁止酶標(biāo)板干燥，因干燥會(huì)使酶標(biāo)板上的生物成分迅速失活。

8．為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

9．禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。

【檢測(cè)步驟概要】

1) 準(zhǔn)備所有的試劑和梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品。板條加入300 μl 1×洗液靜置浸泡30 秒。

2) 標(biāo)準(zhǔn)品孔加入 100 μl 2 倍倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品?？瞻卓准尤?100 μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(血清/血漿樣本)或培養(yǎng)基(細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本)。

3) 血清/血漿：樣本孔加入 90 μl 1×檢測(cè)緩沖液和 10 μl 樣本。細(xì)胞培養(yǎng)上清：樣本孔加入 100 μl 細(xì)胞培養(yǎng)上清。

4) 每孔加入 50 μl 1:100 稀釋的檢測(cè)抗體。步驟 2、3、4 在 15 分鐘內(nèi)完成。

5) 封膜，室溫孵育 1.5 小時(shí)。

6) 洗滌 6 次。

7) 每孔加入 100 μl 1:100 稀釋的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。

8) 封膜，室溫孵育 30 分鐘。

9) 洗滌 6 次。

10) 每孔加入 100 μl 顯色底物，避光，室溫孵育 5 - 30 分鐘。

11) 每孔加入 100 μl 終止液。

12) 30 分鐘內(nèi)，在 450 nm 波長(zhǎng)檢測(cè) OD 值，參考波長(zhǎng) 570 nm 或 630 nm。

【結(jié)果判斷】  

1. 以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 如有設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計(jì)算。 以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。