產(chǎn)品名稱：人干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒
英文名稱：Human IP-10/CXCL10 elisa kit
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
保存條件:2-8℃
用途：僅供科研使用！

背景：
趨化因子配體10(CXCL10)又稱為γ-干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10)或微小誘導(dǎo)細(xì)胞因子B10，是屬于CXC趨化因子家族的小分子量細(xì)胞因子。多種類型的細(xì)胞對(duì)IFN-γ產(chǎn)生應(yīng)答后可分泌IP-10，包括單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等。IP-10具有多種功能，如對(duì)單核/巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、NK細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞的趨化作用，促進(jìn)T細(xì)胞黏附于內(nèi)皮細(xì)胞，抗腫瘤活性和抑制骨髓集落形成和血管生成。

檢測(cè)原理：
將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體，將未結(jié)合的抗體洗凈后再次徹di洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（O.D.值），計(jì)算樣品濃度。

自備物品:
酶標(biāo)儀(450nm)
高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱

自備的設(shè)備及試劑:
1. 450±10nm濾光片的酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)
2. 單道或多道微量加液器及吸頭
3. 稀釋樣品的EP管
4. 蒸餾水或去離子水
5. 吸水紙
6. 盛放洗液的容器

 操作流程如下:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。