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維生素B1檢測試劑盒(熒光光度法)使用說明書

時間:2023-7-20閱讀:35
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產(chǎn)品組成:
 名稱 編號    R31918 50T     Storage    
試劑(A):VitaminB1標準(100μg/ml)    1ml    4℃避光    
試劑(B):組織勻漿液(10×)    250ml    RT    
試劑(C):樣品校正液    100ml    RT    
試劑(D):沸石    100g    RT    
試劑(E):樣品洗脫液    500ml    RT     
試劑(F):VitaminB1氧化液    120ml    RT    
試劑(G):VitaminB1檢測液    30ml    RT避光    
試劑(H):硫酸鹽    100g    RT    
試劑(I):亞硫酸鹽    3×100mg    RT    
使用說明書    1份    

保質(zhì)期::6個月有效;4℃運輸,4℃保存。

產(chǎn)品簡介:
維生素B1(VitaminB1)又稱硫胺素,屬于水溶性xing維生素,在有氧化劑存在時容易被氧化產(chǎn)生脫氫硫胺素,后者在有紫外光照射時呈現(xiàn)藍色熒光。
維生素B1檢測試劑盒(熒光光度法)是利用VitaminB1水溶液在堿性鹽溶液中能被氧化成藍色的硫色素(一種熒光化合物),在紫外線下硫色素發(fā)出熒光,在激發(fā)波長365nm,發(fā)射波長435nm,在沒有其他熒光物質(zhì)干擾時熒光強度與硫色素的濃度呈正比,可定量檢測維生素B1的含量,如果樣品中存在干擾物質(zhì),可用沸石吸附VitaminB1,以便去除待測樣品中干擾熒光測定的雜質(zhì)。該試劑盒僅用于科研領域,不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料:
1、蒸餾水
2、pH計
3、離心管或試管
4、正丁醇
5、熒光光度計

操作步驟(僅供參考):
1、稀釋組織勻漿液:按組織勻漿液(10×):蒸餾水=1:9的比例稀釋,獲得1×組織勻漿液。
2、稀釋標準品:取適量的VitaminB1標準(100μg/ml),按VitaminB2標準(100μg/ml):蒸餾水=1:99稀釋成VitaminB1標準(1μg/ml),4℃避光保存。
3、制備亞硫酸鹽工作液:取一支試劑(I)-亞硫酸鹽100mg粉末,充分溶解于0.5ml蒸餾水中配制成200mg/ml的亞硫酸鹽工作液,即配即用。
4、(選做)制備樣品:取待測材料如麥麩等,準確稱量2~5g,加入研磨器內(nèi),加入少量1×組織勻漿液,研磨碎,再次用1×組織勻漿液研磨,最后一并倒入50ml離心管,補充1×組織勻漿液至25ml,充分混勻,沸水中孵育30min,冷卻至室溫,用樣品校正液調(diào)節(jié)pH至4.5,3500g離心10min,取上清加入2g沸石,振搖30min,棄液,蒸餾水清洗沸石2次,棄洗液,加入2.5ml樣品洗脫液攪拌沸石,洗脫2~3次,將洗脫液合并,并用樣品洗脫液定容至10ml,即為樣品凈化液。VitaminB1氧化:按下表操作,注意避光操作。

加入物(ml)    空白管    測定管    標準空白管    標準管
VitaminB1標準(1μg/ml)    -    -    2.5    2.5
樣品凈化液    2.5    2.5    -    -
VitaminB1氧化液    1.5    0.9    1.5    0.9
VitaminB1檢測液    -    0.6    -    0.6
振搖15s
正丁醇    5    5    5    5
劇烈振搖90s,靜置分層,吸取下層溶液丟棄;上層溶液加入1.5g硫酸鹽混勻使脫水。

VitaminB1檢測:選用恰當?shù)臑V色片,測定的激發(fā)波長為365nm,發(fā)射波長為435nm,
提前預熱儀器30min,分別檢測測定管和標準管的熒光值,同時向空白管和標準空白管的
剩余液中加入0.05ml亞硫酸鹽工作液,立即混勻,在20~30s內(nèi)測出各管的熒光值,作為
各自的空白值。

計算:
VitaminB1含量(mg/100g)=(A測定-A空白)×S×N×100/{(A標準-A標準空白)×m×1000}
式中:A測定=測定管的熒光值
A空白=空白管的熒光值
S=標準管中VitaminB1含量(μg)
N=稀釋倍數(shù)
A標準=標準管的熒光值
A標準空白=標準空白管的熒光值
m=樣品的質(zhì)量(g)

注意事項:
1、在上述操作中,要嚴格避免VitaminB1受到陽光直射。
2、待測樣品如不能及時測定,應置于2~8℃保存,3天內(nèi)穩(wěn)定。
3、如果樣品濃度過高,應用蒸餾水稀釋后重測,結果乘以稀釋倍數(shù)。



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