全血乳酸檢測(cè)試劑盒(對(duì)羥基聯(lián)苯比色法)說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
全血乳酸檢測(cè)試劑盒(對(duì)羥基聯(lián)苯比色法)
乳酸(Lactic acid，LD)又稱 2-羥基丙酸是一種化合物，是一種含有羥基的羧酸，分子式是C3H6O3，參與生物化學(xué)很多反應(yīng)過(guò)程。乳酸檢測(cè)有化學(xué)氧化法、酶催化法、電化學(xué)法、酶電極感應(yīng)器法等。
全血乳酸檢測(cè)試劑盒(對(duì)羥基聯(lián)苯比色法)其檢測(cè)原理是將血液去除蛋白質(zhì)后加入硫酸銅等試劑再除去葡萄糖和其他干擾物質(zhì)，再向處理過(guò)的溶液中加入硫酸，加熱后乳酸被氧化為乙醛，后者與對(duì)羥基聯(lián)苯作用產(chǎn)生紫色的縮合物，其紫色縮合物的生成量與血液中乳酸濃度有關(guān)。將標(biāo)準(zhǔn)與樣品同樣處理，可通過(guò)比色分析計(jì)算出血液中的乳酸含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱     50T    Storage    
試劑(A): 乳酸標(biāo)準(zhǔn)(1mmol/L)    2ml    4℃ 避 光    
試劑(B): 蛋白沉淀劑    50ml    RT 避 光    
試劑(C): 硫酸銅溶液    52ml    RT    
試劑(D): 氫氧化鈣    60g    RT    
試劑(E): LD 顯色液    5ml    RT 避 光    
使用說(shuō)明書(shū)    1 份    

自備材料：
1、離心管或小試管
2、蒸餾水
3、濃硫酸
4、水浴鍋
5、離心機(jī)
6、分光光度計(jì)
7、比色杯

操作步驟(僅供參考)：
1、配制蛋白沉淀工作液：按蛋白沉淀劑：蒸餾水=1 : 4 比例配置，充分混勻，即為蛋白沉淀工作液。避光保存。該試劑有一定腐蝕性，請(qǐng)小心操作。
2、配制硫酸銅工作液：按硫酸銅溶液：蒸餾水=1 : 4 比例配置，充分混勻即成。
3、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：
①按下表稀釋乳酸標(biāo)準(zhǔn)(1mmol/L)，
加入物(ml)    1    2    3    4    5    
乳酸標(biāo)準(zhǔn)(1mmol/L)    0.02    0.04    0.06    0.08    0.10    
蒸餾水    0.98    0.96    0.94    0.92    0.90    
相當(dāng)于全血乳酸的濃度(mmol/L)    1    2    3    4    5    
②取各標(biāo)準(zhǔn) 1ml 加入到離心管中，加入 1ml 硫酸銅溶液和 8ml 蒸餾水，混勻。再加入氫氧化鈣約 1g，用力振搖 30s。如果混合物不呈亮藍(lán)色，則應(yīng)多加一些氫氧化鈣。
③室溫放置 30min，每隔 10min 振搖一次。5000 r/min 離心 5min，上清液備用。

4、樣品準(zhǔn)備：
①取離心管，先加入 4.5ml 蛋白沉淀工作液，然后逐滴加入 0.5ml 血液，邊加邊搖，管蓋蓋緊后用力振搖 30s。室溫放置 5min，5000r/min 離心 3min。
②取上清液 2ml 加入到離心管中，加入 1ml 硫酸銅溶液和 7ml 蒸餾水，混勻。再加入氫氧化鈣約 1g，用力搖勻 30s。
③室溫放置 30min，每隔 10min 振搖一次。5000 r/min 離心 5min，上清液備用。

5、LD 加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的 LD 濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行管。

加入物(ml)    空白管    標(biāo)準(zhǔn)管    測(cè)定管    
蒸餾水    1    -    -    
系列標(biāo)準(zhǔn)上清液(1~5 號(hào))    -    1    -    
樣品上清液    -    -    1    
硫酸銅工作液    0.05    0.05    0.05    
充分混勻，在不斷振搖的情況下加入濃硫酸各 8ml，振搖并混勻。沸水浴加熱 5min，自來(lái)水冷卻至 20℃左右。    
LD 顯色液    0.1    0.1    0.1    

LD 顯色液應(yīng)直接加入酸中(勿沿管壁)，用力振搖以混勻沉淀物。各管置于 30℃水浴中孵育 30min，每 10min 振搖一次，使沉淀的試劑再次分散，溶液最終顯紫藍(lán)色。如顯紅紫色則表明溫度太高，必須重做。然后再放入沸水中嚴(yán)格水浴 90s，此時(shí)溶液應(yīng)wan全清澈，顯紅紫色。流動(dòng)自來(lái)水冷卻至室溫備用待檢。

6、LD 檢測(cè)：各管冷卻后，比色杯光徑 1cm，以空白管調(diào)零，用分光光度計(jì)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管 565nm 處吸光度(即 A 標(biāo)準(zhǔn)、A 測(cè)定)。

計(jì)算結(jié)果：
標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：以系列乳酸標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，各管吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程可計(jì)算得出樣品中的乳酸濃度。
亦可做固定濃度(2 mmol/L)的樣品對(duì)照，根據(jù)公式計(jì)算樣品中乳酸的濃度： 乳酸(mmol/L)=(A 測(cè)定/A 標(biāo)準(zhǔn))×2×N
式中：A 測(cè)定=測(cè)定管的吸光度A 標(biāo)準(zhǔn)=標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度N=樣品稀釋倍數(shù)

參考區(qū)間：
靜脈全血乳酸  0.55～2.2mmol/L(安靜狀態(tài))

注意事項(xiàng)：
1、本方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確精密而特異，但是操作麻煩費(fèi)時(shí)。
2、建議在安靜狀態(tài)時(shí)抽血并盡快制備無(wú)蛋白血上清液，及時(shí)檢測(cè)。當(dāng)劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)血乳酸可達(dá) 11 mmol/L 以上，恢復(fù)時(shí)將迅速降低。病理狀態(tài)下血酸亦可上升為 2~26 mmol/L， 通常在 7 mmol/L 時(shí)，臨床上出現(xiàn)乳酸性酸中毒。
3、糖尿病酮癥酸中毒昏迷時(shí)，血乳酸增高，一般不超過(guò) 7 mmol/L。嚴(yán)重肝臟病時(shí)，可引起血乳酸增加，尿毒癥患者亦常伴有乳酸酸中毒。
4、應(yīng)采用含氟化鈉的抗凝劑，可防止血液樣本在放置期間葡萄糖酵解轉(zhuǎn)變?yōu)槿樗?，造成假性增高?br/>5、每個(gè)樣品中氫氧化鈣的加入量不需要準(zhǔn)確稱量，以混合物呈亮藍(lán)色為準(zhǔn)。
6、LD 顯色液與酸接觸時(shí)即產(chǎn)生沉淀，故應(yīng)滴加在液面上并立即搖勻，使沉淀物盡快分散成小顆粒；在 30min 放置期間，應(yīng)不時(shí)振搖使顆粒漸漸消散；最后沸水浴 90s，使顆粒wan全消失，液體透明。

有效期：4℃保存，6 個(gè)月有效。低溫運(yùn)輸。