吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)雙熒光染色試劑盒說明書

產(chǎn)品簡介：
細(xì)胞凋亡（Apoptosis）的檢測(cè)方法有形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、DNA 片段化檢測(cè)方法以及TUNEL 等標(biāo)記片段化 DNA 方法，但從細(xì)胞凋亡概念產(chǎn)生的歷史及準(zhǔn)確性方面考慮，使用顯微鏡進(jìn)行的形態(tài)學(xué)觀察也是很重要的。細(xì)胞死亡的檢測(cè)可以通過熒光色素染色區(qū)分活細(xì)胞、 死細(xì)胞， 測(cè)定細(xì)胞代謝活性和形態(tài)學(xué)觀察。這些方法都是利用細(xì)胞凋亡這種情況進(jìn)行測(cè)定的，因而不一定反映實(shí)際情況。MTT 法是測(cè)定線粒體中te有酶的活性，反映細(xì)胞數(shù)目的變化，其結(jié)果與細(xì)胞死亡的數(shù)目未必wan全一致。

吖啶橙(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料, 既可以標(biāo)記 DNA，又可以標(biāo)記RNA,屬于異染性熒光染料，因此 AO 常用于細(xì)胞內(nèi) DNA 和 RNA 進(jìn)行檢測(cè)。AO 與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO 嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間，這種結(jié)合方式主要為 AO與 DNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 530nm，激發(fā)后呈綠色熒光； 2、靜電吸引，帶正電荷的AO 與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合，這種結(jié)合方式主要為 AO 與RNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會(huì) 呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，吖啶橙嵌合到雙鏈 DNA 分子中顯綠色，與 DNA 單鏈或 RNA 結(jié)合時(shí)發(fā)橙紅色熒光。

溴化乙錠（Ethidium Bromide,EB）嵌合到雙鏈 DNA 或 RNA 的堿基對(duì)中，無堿基特異性，發(fā)紅色熒光。吖啶橙可透過活細(xì)胞膜，EB 不能通過與活細(xì)胞膜具有相同通透性的細(xì)胞膜。

產(chǎn)品組成：                                                   
試劑(A): AO solution                200ul              4℃ 避光
試劑(B): EB solution                200ul                RT
試劑(C): AO/EB Dilution Buffer       50ml              4℃ 避光
使用說明書 1 份

自備材料：
1、 熒光顯微鏡
2、 PBS
3、 細(xì)胞計(jì)數(shù)板
4、 載玻片、蓋玻片

操作步驟（僅供參考） ：
1、收集細(xì)胞，用PBS清洗細(xì)胞1次，加入適量的PBS重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至（0.2~5）*106/ml。
2、 AO/EB 工作液的配制：取試劑(A)、試劑(B)、試劑(C)， 按照試劑(A):試劑(B):試劑(C)=1:1:8 的比例稀釋成 AO/EB 工作液。
3、 每25~50ul細(xì)胞懸液中加入AO/EB工作液2ul，混合均勻，孵育5-15min。
4、 取潔凈載玻片，滴加上 5~10ul 細(xì)胞懸液，輕輕蓋上蓋玻片。
5、 在熒光顯微鏡 B 域進(jìn)行觀察。

染色結(jié)果：顯綠色熒光的為活細(xì)胞；顯橙色熒光的為死細(xì)胞。

注意事項(xiàng)：
1、用能通過活細(xì)胞膜與 DNA 結(jié)合后發(fā)藍(lán)色熒光的 Hoechst 33342 和只能通過死細(xì)胞與
DNA 結(jié)合后發(fā)紅色熒光的 propidium iodide，PI)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行 雙染的方法也比較常用。
2、 如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。
3、 操作過程中應(yīng)注意減少試劑(A)、試劑(B)暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。
4、 試劑(B)有一定毒性，請(qǐng)小心操作。
5、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 6 個(gè)月有效。