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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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辛基-瓊脂糖凝膠CL-4B生化試劑用途介紹

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中文名稱:辛基-瓊脂糖凝膠CL-4B
性狀:白色微球,凝膠狀,保存在20%酒精溶液中
凝膠類型:疏水層析填料
結(jié)構(gòu)成分:4%交聯(lián)瓊脂糖
粒徑:45-165μm
工作PH值:2-14(短時(shí)間);3-12(長(zhǎng)時(shí)間)
操作溫度:4-40℃
配基密度:35μmol/mL
操作溫度:室溫
貯存:產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在 4℃~25℃(保存溶液為 20%乙醇),通風(fēng)、干燥、清潔的地方,不能冷凍。用過(guò)的柱子貯存在 4℃(20%乙醇)。

 

應(yīng)用:
本產(chǎn)品具有高化學(xué)穩(wěn)定性、高流速、高載量、好的機(jī)械性能、可在位清洗、多次重復(fù)使用等特點(diǎn),非特異性吸附低,回收率高,適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn),適用于在 pH 工作范圍內(nèi)可形成正離子的生物大分子的分離純化,廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。

 

辛基-瓊脂糖凝膠 CL-4B 是將辛基鍵合在瓊脂糖凝膠 CL-4B 上形成的一種可利用疏水相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的疏水類介質(zhì)。

 

使用方法:
1.裝柱
① 將所有的試劑和填料達(dá)到室溫.配制初始緩沖液(平衡液)和緩沖液。
② 根據(jù)柱子大小取所需凝膠的量,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1比例)配成勻漿。
③ 將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液體(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
④ 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意不要使用氣泡。打開(kāi)柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。
⑤ 打開(kāi)蠕動(dòng)泵,讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò),使柱床穩(wěn)定。用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

 

2.平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子,到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,如:0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。

 

3.上樣
① 樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心、過(guò)濾后上柱;
② 一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,用平衡洗液洗去雜質(zhì),再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
③ 介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度。溫度越大、鹽濃度越高或樣品組分疏水性越強(qiáng),介質(zhì)對(duì)組分吸附越牢。

 

4.洗脫
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫。加表面活性劑或者有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫。最chang用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液,如:0.02~0.05mol/L的PBS。

 

5.再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗,洗10倍以上柱體積,接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。若有失活的蛋白或者脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。

 

6.在位清洗
① 對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,可以用2M NaCl去除。
② 對(duì)沉淀蛋白、以疏水作用結(jié)合的蛋白或者脂類物質(zhì),可用1M  NaOH去除。
③ 對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等,可用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產(chǎn)生氣泡。清洗完畢后,用至少3倍柱體積緩沖液平衡柱子。

 

7.去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或者用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)?;蛴靡韵虏襟E去除:
① 2倍柱體積的70%的乙醇;
(2)2倍柱體積50mM Tris-HCl pH7.5
③ 1倍柱體積4M尿素
④ 3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M NaCl;
以上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。

 

8.消毒
用0.5~1.0M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。

 

注意事項(xiàng):
1.密封貯存于4~28℃(保存溶液為20%乙醇+0.1M醋酸鈉),通風(fēng)、干燥的地方,不能冷凍。用過(guò)的柱子貯存于4℃(20%乙醇)。
2.在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候,要避免柱子流干,氣泡進(jìn)入。

 

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