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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
中級會(huì)員 | 第12年

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酸性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ)操作步驟

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中文名:酸性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ)
英文名稱:Acid L-G Medium Base
產(chǎn)品規(guī)格:250g
用途:用于堿性物質(zhì)處理的結(jié)核桿菌標(biāo)本。

 

成分(g/ 600ml):
磷酸2氫鉀 14.0
硫-酸鎂 0.24
檸檬酸鎂  0.6
L-谷氨-酸鈉  7.2
孔雀綠  0.4
馬鈴薯淀粉  30.0

 

用法
稱取本品 52.44g,并吸取甘油12ml,加熱攪拌溶解于 600ml蒸餾水中,煮沸 5-10 分鐘,121℃高壓滅菌 15  分鐘取出。待冷至55℃左右時(shí),以無菌操作加入無菌攪勻的全蛋液 1000ml,混勻 ( 避免產(chǎn)生氣泡 ),分裝18 mm × 180mm 試管,每管 7ml,置成長斜面 ,用 85 -  90℃流動(dòng)蒸汽處理1-1.5小時(shí)后,取出放冷備用。

 

結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)簡稱為結(jié)核桿菌(tubercle bacilli),是人類結(jié)核病的病原體。結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長略帶彎曲的桿菌,大小1~4X0.4μm。牛分枝桿菌則比較粗短。分枝桿菌屬的細(xì)菌細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高,約占干重的60%,大量分枝菌酸(mycolic acid)包圍在肽聚糖層的外面,可影響染料的穿入。分枝桿菌一般用齊尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法,以5%石炭酸復(fù)紅加溫染色后可以染上,但用3%鹽酸乙醇不易脫色。若再加用美藍(lán)復(fù)染,則分枝桿菌呈紅色,而其他細(xì)菌和背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。本菌無芽孢、無鞭毛。

 

培養(yǎng)特性:專性需氧。最適溫度為37℃,低于30℃不生長。結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁的脂質(zhì)含量較高,影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收,故生長緩慢。結(jié)核菌在含氧40%~50%并有5%~10%CO2和溫度為36℃±5℃,合適PH值為6.8~7.2的條件下生長旺盛。在一般培養(yǎng)基中每分裂1代需時(shí)18~24小時(shí),營養(yǎng)豐富時(shí)只需5小時(shí)。

 

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