產(chǎn)品名稱：還原糖檢測(cè)試劑盒(斐林微板法)
分類：生化檢測(cè)
規(guī)格：200T
儲(chǔ)存條件：4℃,避光,12個(gè)月
用途：用于植物還原糖含量的檢測(cè)，也用于食品中還原糖的含量檢測(cè)。
注意事項(xiàng)：檢測(cè)原理還原糖含有醛基和酮基，堿性環(huán)境加熱煮沸的條件下可以將斐林試劑（堿性酒石酸銅試劑）中的二價(jià)銅離子還原為一價(jià)銅，使藍(lán)色的斐林試劑脫色，脫色的程度與溶液中含糖量呈正比，可再590nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可算出待測(cè)樣品中還原糖的含量。試劑含有強(qiáng)堿，有腐蝕性，需小心操作。

產(chǎn)品說明：
作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交聯(lián)或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。生物體內(nèi)的分子氧可以經(jīng)過單電子還原轉(zhuǎn)變?yōu)槌蹶庪x子自由基(O2-)，超氧陰離子自由基既可以直接作用于蛋白質(zhì)和核酸等大分子，也可以衍生為羥自由基、單線態(tài)氧、過氧化氫及脂質(zhì)過氧物自由基等對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能具有破壞作用的活性氧。

超氧陰離子自由基檢測(cè)試劑盒(磺胺比色法)又稱超氧陰離子產(chǎn)生速率檢測(cè)試劑盒，其檢測(cè)原理是在酸性條件下，2份O2-與羥胺反應(yīng)生成1份NO2-，NO2-在對(duì)氨基苯磺酸和萘胺的作用下反應(yīng)生成粉紅色的偶氮物質(zhì)，以分光光度計(jì)測(cè)定530nm處吸光度，在一定范圍內(nèi)顏色深淺與O2-成正比，根據(jù)A530及NO2-和O2-的相關(guān)反應(yīng)中物質(zhì)的量的關(guān)系，可算出樣品中O2-的濃度。該試劑盒主要用于測(cè)定植物組織中的超氧陰離子自由基含量或超氧陰離子的產(chǎn)生速率及清除能力。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

還原糖檢測(cè)試劑盒(斐林微板法)自備材料：
1、蒸餾水
2、實(shí)驗(yàn)材料：植物組織(大豆、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等
3、研缽或勻漿器
4、離心管或試管
5、低溫離心機(jī)
6、恒溫箱或水浴鍋
7、分光光度計(jì)、比色杯 編號(hào) 名稱 TO1123 50T Storage 試劑(A): NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM) 1ml 4℃  試劑(B): O2- Lysis buffer 125ml 4℃ 試劑(C): 羥胺溶液 30ml 4℃ 試劑(D): 氨基苯磺酸顯色液 30ml 4℃ 避光 試劑(E): 萘胺顯色液 30ml 4℃ 避光 使用說明書 1 份  

還原糖檢測(cè)試劑盒(斐林微板法)操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備樣品：
①植物樣品：取正常或逆境下的新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取 1~1.5g， 加入 2ml 預(yù)冷的 O2- Lysis buffer 后冰浴條件下勻漿或研磨，4℃ 10000g 離心 10min， 上清液即為超氧陰離子自由基提取液，4℃保存?zhèn)溆谩?
②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè) 定，4℃保存，用于超氧陰離子自由基的檢測(cè)。
③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的超氧陰離子自由基，可以使用 O2- Lysis buffer 進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?

2、配制系列 NO2-標(biāo)準(zhǔn)溶液：取出 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM)恢復(fù)至室溫后，以 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM) 按下表繼續(xù)稀釋：

3、O2-加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意 避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的超氧陰離子自由基濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀 釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行管。

4、O2-測(cè)定：以空白調(diào)零，比色杯光徑 1cm，分光光度計(jì)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管 530nm 處 吸光度(即為 A 標(biāo)準(zhǔn)、A 測(cè)定)。

還原糖檢測(cè)試劑盒(斐林微板法)計(jì)算： 以系列 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1~6 號(hào))含量(μM)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲 加入物(ml) 1 2 3 4 5 6 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM) 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 蒸餾水 0.99 0.98 0.97 0.96 0.95 0.94 NO2-含量(μM) 10 20 30 40 50 60 加入物(ml) 空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 測(cè)定管 蒸餾水 1 — — 系列 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1~6 號(hào)) — 1 — 待測(cè)樣品 — — 0.25 O2- Lysis buffer — — 0.25 羥胺溶液 — — 0.5 混勻，25℃水浴孵育 20min。 氨基苯磺酸顯色液 0.5 0.5 0.5 萘胺顯色液 0.5 0.5 0.5 混勻，30℃水浴孵育 30min。根據(jù)測(cè)定管的吸光度進(jìn)而計(jì)算 NO 2-含量。

根據(jù)如下公式計(jì)算具體樣品中超氧陰離子自 由基(O2-)的含量： 植物組織樣品 O2-(μM/g)=2×n×VT/(W×VS) 血清、尿液等樣品 O2-(μM/ml)=2×n×N/VS 超氧陰離子的產(chǎn)生速率的定義：每分鐘每克鮮重組織產(chǎn)生的超氧陰離子的物質(zhì)的量，計(jì) 算公式如下： 超氧陰離子產(chǎn)生速率【μmol/(min*g)】=2×n×VT/(W×t×VS) 測(cè)得樣品中蛋白質(zhì)含量后，可用下面公式表示： 超氧陰離子產(chǎn)生速率【μmol/(min*mg)】=2×n×VT/(m×t×VS) 式中：2=NO2-與 O2-間的化學(xué)計(jì)量數(shù) n=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的 NO2-含量(μM) VT=超氧陰離子自由基提取液總體積(ml) N=樣品稀釋倍數(shù) W=樣品鮮重(g) m=樣品中蛋白質(zhì)含量(mg) t=樣品與羥胺的反應(yīng)時(shí)間(min)=20 VS=測(cè)定時(shí)加入提取液體積(ml)

還原糖檢測(cè)試劑盒(斐林微板法)注意事項(xiàng)：
1、 實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于 4℃。
2、 如果樣品中含有較多的葉綠素，會(huì)干擾測(cè)定結(jié)果，可在加入羥胺溶液 25℃水浴孵育 20min 后用等體積乙mi或三lv甲烷萃取葉綠素，再行顯色反應(yīng)。
3、 如果沒有分光光度計(jì)，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測(cè)定，但應(yīng)考慮酶標(biāo)儀的最大檢測(cè)體積。
4、 所測(cè)樣本的濃度過高，應(yīng)用 O2- Lysis buffer 稀釋樣品后重新測(cè)定。
5、 氨基苯磺酸顯色液和萘胺顯色液有強(qiáng)烈的刺激性，盡量在通風(fēng)條件好的地方操作，用后 需擰緊瓶蓋，避免揮發(fā)。

還原糖檢測(cè)試劑盒(斐林微板法)有效期：6 個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。