產品名稱：Super ECL Plus超敏發(fā)光液
產品分類：蛋白其他
產品規(guī)格：50ml/100ml/500ml
儲存條件：4℃,避光,
有效期：12個月
用途：Western blot免疫印跡等印跡發(fā)光顯色
注意事項：ECL是基于Luminol的新一代增強型化學發(fā)光底物試劑,它由辣根過氧化物酶(HRP)催化發(fā)生化學反應,發(fā)出熒光。溶液A主要成分為Luminol及特制發(fā)光增強劑。溶液B主要成分為H2O2及特殊穩(wěn)定劑。

產品簡介：
Super ECL Plus 超敏發(fā)光液用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶 HRP 的抗體及其關聯(lián)的抗原。
1. 可使用更高的抗體稀釋倍數(1:2000～1:10000)，極其節(jié)省抗體；
2. 簡單易用：可替代其它公司的 ECL 發(fā)光底物，操作步驟無需進行特別優(yōu)化；
3. 靈敏度更高：可檢測低皮克級的蛋白；
4. 信號持續(xù)時間更長：光信號持續(xù)時間長達 5 小時；
5. 更多成像方法：適用于 X 射線膠片、CCD 或激光成像儀；
6. 價格更經濟：相比其他品牌的類似產品，不僅具有高品質和高性能，同時價格也更低。

使用說明：
1. 執(zhí)行常規(guī) SDS-PAGE、轉膜和 Western Blot 步驟。注意用 HRP 標記 lgG 或用一抗-鏈親和素-生物su-HRP 夾法。
操作概述：
注：優(yōu)化抗原和抗體的濃度。必須使用建議的抗體稀釋度，以保證陽性結果。
1) 將一抗?jié)舛认♂尩?0.05～1ug/ml
2) 將二抗?jié)舛认♂尩?0.005～0.04ug/mL
3) 將兩種底物組份按 1:1 比例混合，制備底物工作液。
注：暴漏于日光或任何其他強光可能損害工作液，為獲得最佳結果，將此工作液保存在琥珀色瓶中，并避免長期暴漏于任何強光。短時間暴漏于實驗室常規(guī)照明不會損害該工作液。
4) 將印跡膜在 ECL 底物工作液中孵育 5 分鐘。
5) 吸出多余試劑。用清潔的塑料膜蓋住該印跡膜。
6) 使印跡膜在 X 光膠片上曝光。

2. Western Blot 最后一次洗膜的同時新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液 A 和 B，放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液，室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低。

3. 用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入發(fā)光工作液（0.125mL 發(fā)光工作液/cm2膜）中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育 3 分鐘，準備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質是酶促反應，使用過少的發(fā)光工作液不利反應進行，也會導致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
4. 用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
5. 打開 X 光膠片暗盒，在暗盒內表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將 Western Blot 膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包裹 Western Blot 膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋 Western Blot 膜的保鮮膜固定在暗盒內，蛋白帶面向上。
6. 暗房內壓 X 光膠片，分別曝光不同的時間如數秒到數分鐘。顯影沖洗。

注意事項：
1. A 液和 B 液在吸取過程中必須要更換槍頭，上述試劑相互污染后會導致 A 液或 B 液逐漸失效，影響后續(xù)的使用效果。
2. 步驟 1～5 可在日光燈下操作；但發(fā)光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印。
3. 為獲得最佳實驗效果，應注意優(yōu)化實驗條件，包括實驗檢測樣品的用量、一抗稀釋度、二抗稀釋度、雜交膜及封閉液的選擇等。
4. 當使用親和素/生物su系統(tǒng)時，應避免使用含有脫脂奶粉的封閉液。
5. 洗滌液、封閉液、抗體稀釋液、ECL 工作液應足量使用，確保印跡膜處于濕潤狀態(tài)。
6. NaN3 能抑制 HRP 活性，回收第二抗體應避免使用 NaN3，如必需使用勿超過 0.01%。
7. 各溶液使用后，請蓋緊瓶蓋以防失效。
8. 發(fā)光工作液孵育約 3min 后膜上的條帶發(fā)光。強條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使 X 光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續(xù)數小時并使 X 光膠片感光，因而弱帶可曝光 1-10 小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 發(fā)光和曝光。熒光持續(xù)時間很長，但開始反應后的 30min 內熒光更強一些，隨后熒光會逐漸減弱，因此請注意充分利用這熒光較強的 30min 進行曝光或成像儀檢測。
9. 長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光不足則條帶模糊。
10. 由于發(fā)光液極其靈敏，建議抗體起始濃度為一抗 1:1000～1:4000，二抗 1:2000～1:5000?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導致失敗。
11. 某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應選擇高質量保鮮膜。
12. 使用肉眼可見的預染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。
13. A 液和 B 液均對人體有害，操作時請注意適當防護。
14. 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
15. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。