產(chǎn)品名稱：紫外法蛋白定量試劑盒
規(guī)格：250T/500T
分類：蛋白檢測
儲存條件：室溫,避光，12個月
用途：紫外光吸收法或呈紫外分光光度法定量檢測總蛋白含量
注意事項(xiàng)：優(yōu)點(diǎn)是：操作迅速、簡便,不易受低濃度鹽類的干擾；缺點(diǎn)是與標(biāo)準(zhǔn)蛋白中酪an酸、色an酸含量差異較大的蛋白質(zhì),準(zhǔn)確性較差。樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸會干擾檢測結(jié)果。

簡介：
蛋白質(zhì)分子中存在含有共軛雙鍵的酪an酸、色an酸、苯丙an酸，使蛋白質(zhì)在270～波長范圍內(nèi)具有吸收紫外光的性質(zhì)，其中酪an酸的最大吸收峰為，色an酸的最大吸收峰為，苯丙an酸的最大吸收峰為。在上述波長范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的吸收值與其濃度呈正比，可作定量測定。
紫外法蛋白定量試劑盒優(yōu)點(diǎn)是：操作迅速、簡便，不易受低濃度鹽類的干擾；缺點(diǎn)是與標(biāo)準(zhǔn)蛋白中酪an酸、色an酸含量差異較大的蛋白質(zhì)，準(zhǔn)確性較差。樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸會干擾檢測結(jié)果。

自備材料：
1.分光光度計或酶標(biāo)儀
2.96孔板或離心管

操作步驟：
1、用去離子水或蒸餾水稀釋蛋白稀釋液(10×，即為蛋白稀釋工作液。取蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入蛋白稀釋工作液，即配制成蛋白標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)，-20°保存。

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線法：取若干試管或96孔板，如下操作以分光光度法為例。光度法為例。選用石英比色皿，在280nm處以第1管作為調(diào)零點(diǎn)，分別檢測各管吸光度，以A280為縱坐標(biāo)，以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

取1ml待測蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計或酶標(biāo)儀測定A280。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品的蛋白濃度。
3、Lowry-Kalckar法(又稱280nm和260nm吸收差法)：對于含有核酸的蛋白質(zhì)，無需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。以蛋白稀釋工作液作為調(diào)零點(diǎn)，取待測蛋白加至蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計或酶標(biāo)儀測定A280和A260。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式計算出待檢測樣品的蛋白濃度，如果蛋白濃度過高應(yīng)用蛋白稀釋工作液稀釋后再行檢測。
蛋白質(zhì)濃度（g/L）=1.45xA280-0.74xA280
4、Waddell法(又稱215nm和225nm吸收差法)：對于蛋白質(zhì)含量較少的溶液，適用于該法。若取干試管或96孔板，如下操作以分光光度法為例。以蛋白稀釋工作液作為調(diào)零點(diǎn)，取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)（1mg/ml）加至蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計或酶標(biāo)儀測定A215和A225。以215nm與225nm吸光度值之差(D=A215-A225)為縱坐標(biāo)，以蛋白濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再測出未知樣品的吸收差，即可由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出未知樣品的蛋白質(zhì)濃度?；蛘卟挥弥谱鳂?biāo)準(zhǔn)曲線，直接按照如下經(jīng)驗(yàn)公式計算：
蛋白質(zhì)濃度（g/L）=144x（A215-A225）

注意事項(xiàng)：
1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白稀釋工作液，該液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)液-20°保存。
2.待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，樣的稀釋液中，否則待測蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測定不準(zhǔn)確。
3.如果沒有分光光度計，也可以使用酶標(biāo)儀測定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測體積。
4.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。