中文名稱：NP-40裂解液
分    類：蛋白提取
規(guī)    格：100ml
保存條件：—20℃,12個(gè)月
用    途：裂解細(xì)胞提取總蛋白質(zhì),主要用于Western,免疫沉淀,免疫共沉淀等
注意事項(xiàng)：主要由NP-40、氯化鈉、Tris組成,NP-40為最chang用的去污劑之一。含有一支1.5ml PMSF。

簡介：
NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP和co-IP等。主要成分為50 mM Tris(pH7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。用NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

使用方法：
A． 對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
取適當(dāng)量的RIPA裂解液混勻，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。

B．對于貼壁細(xì)胞，
去除培養(yǎng)液用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。輕輕的搖晃約5-10 min。充分裂解后，10000-14000g離心10 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)操作。

C． 對于懸浮細(xì)胞：
離心收集細(xì)胞，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適量裂解液,用槍吹打把細(xì)胞吹散。用手指輕彈或旋渦震蕩5-10 min以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000 g離心10 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)操作。

D．對于組織樣品：
1)  手術(shù)切除的組織塊迅速置于預(yù)冷的生理鹽水中，漂洗數(shù)次，以清潔表面的血跡，將組織稱量后切成幾個(gè)較小的組織塊放入組織勻漿器中。
2)  取適當(dāng)量的RIPA裂解液混勻，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。
3)  按組織凈重（g）：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相應(yīng)體積的裂解液進(jìn)行勻漿(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品， 可以適當(dāng)減少裂解液的用量) 。
4)  用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5)  充分裂解后，10000-14000 g離心3- 5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)作。

注意事項(xiàng)：
1)  抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。建議將樣品分裝成合適的量，然后冷凍干燥或直接以液體狀態(tài)置-20℃中保存，不要反復(fù)凍融。
2)  需自備PMSF。建議在臨用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。
3)  為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。