中文名稱：BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱：BL21(DE3)pLysS Competent Cell
產(chǎn)品規(guī)格：100μl×10支
用途：基因克隆表達(dá)
注意事項(xiàng)：BL21(DE3)pLysS受體菌含有表達(dá)T7溶菌酶的基因,適合毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)
儲(chǔ)存條件：-20℃。

簡(jiǎn)介：本產(chǎn)品是大腸桿菌BL21(DE3)pLysS菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。該菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，具有氯霉素抗性，適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。PLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾目的蛋白的表達(dá)。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)107。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)
1、感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃下保存，不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2、轉(zhuǎn)化所有步驟均在無(wú)菌條件下操作。
3、包裝中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供對(duì)照試驗(yàn)使用。

使用方法：
1、取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2、待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3、42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4、向每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。
5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。

注意：
1)涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少，可通過(guò)離心(4000rpm，2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。