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中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)實(shí)驗(yàn)步驟

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產(chǎn)品名稱:中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)
產(chǎn)品規(guī)格:3×10ml
產(chǎn)品用途:專門(mén)用于血液或骨髓細(xì)胞涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色,又稱同時(shí)偶聯(lián)法。
注意事項(xiàng):堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色,位于胞槳中。油鏡下計(jì)數(shù)101個(gè)中性粒細(xì)胞,求出百分比和積分。非特異性反應(yīng)少,結(jié)果可靠。
儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月

簡(jiǎn)介:堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,簡(jiǎn)稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織內(nèi),其活性所需最適pH 9.2~9.8。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)不是采用金屬沉淀法來(lái)顯示堿性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時(shí)偶聯(lián)法),其原理是在pH9.2~9.8的堿性條件下,細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解,釋放出磷酸與萘酚,后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物,定位于細(xì)胞質(zhì)中。該染液專門(mén)用于血液或骨髓細(xì)胞涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色,位于胞槳,結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。

操作步驟(僅供參考):
(一)、涂片
1、制備新鮮血液或骨髓細(xì)胞涂片,NAP固定液固定,充分水洗。
2、滴加配制好的NAP孵育液孵育,水洗。
3、滴加核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染。水洗、晾干、鏡檢。
(二) 貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
1、取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細(xì)胞,棄液,PBS清洗干凈。
2、加入NAP固定液固定30~60s或4%多聚甲醛固定,PBS清洗。
3、滴加配制好的NAP孵育液,放入濕盒中,避光孵育,PBS清洗。
4、入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染。PBS清洗、鏡檢。

臨床意義:
1、類白血病反應(yīng)積分明顯增高,未經(jīng)治療的慢性粒細(xì)胞白血病積分明顯減低。
2、急性細(xì)菌性感染積分明顯增高,病毒性感染積分多正常或減低。
3、再生障礙性貧血積分常增高,PNH、MDS積分常減低。

注意事項(xiàng):
1、血液或骨髓細(xì)胞涂片應(yīng)新鮮,薄厚適宜,及時(shí)固定,否則會(huì)影響酶的活性。
2、培養(yǎng)細(xì)胞染色操作過(guò)程中,清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微,以免損傷或丟失細(xì)胞。
3、NAP孵育液易失效或降低陽(yáng)性強(qiáng)度,即配即用,不宜久置。
4、復(fù)染時(shí),核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。
5、每次染色時(shí),應(yīng)有陽(yáng)性對(duì)照片。
6、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

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