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普魯士藍染色液(中性紅法)操作步驟

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中文名稱:普魯士藍染色液(中性紅法)
產(chǎn)品規(guī)格:2×50mL|2×100mL
用途:組織三價鐵染色,含鐵血黃素染色
注意事項:又稱Perls染色液,或者柏林藍反應(yīng)。染色結(jié)果為:三價鐵或含鐵血黃素呈藍色,其他呈紅色。推薦采用該法作為含鐵血黃素的主要染色法。
儲存條件:室溫,避光,12個月

產(chǎn)品概述:
含鐵血黃素(Hemosiderin)是一種血紅蛋白源性色素,為金黃色或棕黃色顆粒,因其含鐵,且為金黃色,故稱為含鐵血黃素。Perls普魯士藍反應(yīng)(Prussian blue+reaction)又稱為含鐵血黃素染色,即經(jīng)過亞鐵化鉀和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍色,常見于吞噬細胞或間質(zhì)內(nèi)。普魯士藍染色用于顯示局部組織內(nèi)的各種出血性病變,常見于吞噬細胞內(nèi),可以很好地區(qū)分含鐵血黃素與其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以長期保存、不易產(chǎn)生沉淀、應(yīng)用范圍廣,可以進行復(fù)染,該染色液的復(fù)染液采用中性紅。


使用方法:
(一)石蠟切片染色:
1、組織固定于10%中性福爾馬林,常規(guī)脫水包埋。
2、切片厚度4μm,常規(guī)脫蠟至水。
3、蒸餾水水洗1min。
4、切片入Perlsstain(見注意事項2),浸染15~30min。
5、蒸餾水充分沖洗5~10min。
6、入伊紅染色液,淡染細胞核15~30s。
7、自來水沖洗1~5s。
8、常規(guī)脫水透明,中性樹膠封固
(二)冰凍切片染色:
1、無需脫蠟,直接迅速用蒸餾水沖洗2~3min。
2、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。
(三)細胞染色:
1、4%多聚甲醛固定10~20min
2、自來水沖洗2次,每次2min。
3、蒸餾水沖洗2次,每次2min。
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。

染色結(jié)果:
含鐵血黃素或三價鐵 藍色
細胞核、其他組織 紅色

注意事項:
1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。組織固定常采用10%中性福爾馬林,經(jīng)普通福爾馬林長期固定后,組織會有損傷。避免使用酸性固定劑,鉻酸鹽處理也會妨礙鐵的保存。
2、整個操作過程中容器要干凈,避免用金屬鐵制品,洗切片和容器時以蒸餾水為宜,因普通水內(nèi)含鐵質(zhì)。Perlsstain染色時,應(yīng)根據(jù)樣本情況調(diào)整著色時間。
3、所有切片都應(yīng)使用同一個陽性對照切片,選擇適合的對照非常重要。尸檢肺組織是一個很好的對照,包含相當(dāng)數(shù)量的鐵陽性巨噬細胞(心衰細胞)。
4、冰凍切片和細胞染色,最好根據(jù)具體情況摸索實驗條件。


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