產(chǎn)品名稱：Heidenhain鐵蘇木素染色液
規(guī)格：4X100ml
分類：HE染色
儲存條件：未開封無菌緩沖液4℃情況下，6個月保質(zhì)期。-20℃12個月保質(zhì)期
用途：常規(guī)切片HE染色
注意事項：自然氧化1個月成熟,以硫酸鐵銨作為氧化劑和分化劑,應(yīng)在顯微鏡下控制分化程度,直到出現(xiàn)所需結(jié)構(gòu)。染色時間一般在1個小時。

簡介：Heidenhain鐵蘇木素染色液:Heidenhain鐵蘇木素染色液產(chǎn)品簡介：蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯(lián)合染色簡稱HE染色，是病理學(xué)和組織學(xué)生物實驗中常用的一種染色方法。蘇木 精為堿性天 然染料，可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的主要成分是DNA，在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木 精堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。

Heidenhain鐵蘇木素染色液以硫酸鐵銨作為氧化劑和分化劑，根據(jù)不同的分化程度可顯示不同的結(jié)構(gòu)。染色后所有成分均為黑色或深灰黑色，不同組織結(jié)構(gòu)的蘇木素著色可被Heidenhain分化液以不同的速度進行性褪去，黑色褪去順序依次為：線粒體、橫紋肌、核染色質(zhì)。

染色原理：
1、細胞核染色的原理：蘇木素為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。

2、細胞漿染色的原理：伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細胞漿著色。細胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細胞漿的染色與染液的pH值密切相關(guān)。當(dāng)染色液pH值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(4.7～5.0)以下時，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細胞漿帶正電荷，就可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子，與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽離子結(jié)合，使細胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。

3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去，這個過程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液。在HE染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu)，使組織與色素分離而退色。大多數(shù)組織經(jīng)蘇木素染色后，必須用1%鹽酸乙醇分化，使細胞核過多結(jié)合的蘇木素染料和細胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進行伊紅染色，才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。

4、返藍作用：分化之后，蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍色離子狀態(tài)，呈藍色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，立即用水除去組織切片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細胞核呈現(xiàn)藍色，這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍，但所需時間較長。

操作步驟(僅供參考)：
1、切片脫蠟至水
①二甲苯作用。
②(可選)無水乙醇作用。
③95%的乙醇④90%的乙醇
⑤80%的乙醇
⑥自來水或蒸餾水沖洗

2、染色
①HeidenhainDifferentiation媒染(見注意事項1)
②蒸餾水沖洗(見注意事項1)
③Heidenhain鐵蘇木素染色液染色
④自來水沖洗
⑤（可選步驟）伊紅復(fù)染液染色
⑥HeidenhainDifferentiation分化或用蒸餾水1:1稀釋HeidenhainDifferentiation分化，并與自來水沖洗交替進行，顯微鏡下觀察分化程度。(見注意事項2)
⑦自來水沖洗

3、脫水、透明、封固
①80%乙醇②90%乙醇
③95%乙醇作用。
④無水乙醇作用。
⑤二甲苯透明。
⑥中性樹脂封片。
染色結(jié)果：線粒體、橫紋肌、髓磷脂、染色質(zhì)等呈灰黑色。

注意事項：
1、HeidenhainDifferentiation媒染時間和Heidenhain鐵蘇木素染色液染色時間根據(jù)不同的固定液而異。一般情況下，媒染和染色時間控制在1h即可，參考時間為：福爾馬林、Bouin固定液、Carnoy固定液1h，Helly、Zenker等重鉻酸鹽固定液3h，四yang化鋨、Flemming固定液24h。
2、顯微鏡下控制分化程度，直到出現(xiàn)所需觀察的結(jié)構(gòu)。若分化過度，可用蘇木素重染相同時間并重新分化。亦可用蒸餾水2:1稀釋HeidenhainDifferentiation后再進行分化，以便更好控制分化程度。
3、切片分化后應(yīng)*沖洗洗掉所有分化液，組織不易褪色。
4、胞漿復(fù)染(伊紅或橙黃G)可突出核染色質(zhì)，尤其在顯示染色體或有絲分裂更有效，本試劑提供了伊紅復(fù)染液，但不是必需步驟。
5、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。
6、系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。
7、冷凍切片染色時間盡量要短。
8、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。