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中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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糖原PAS染色液(真菌專(zhuān)用)使用方法

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中文名稱(chēng):糖原PAS染色液(真菌專(zhuān)用)
產(chǎn)品規(guī)格:3×20mL|3×50mL
用途:大多數(shù)真菌染色(曲菌、白色念珠菌、組織胞漿菌、馬爾尼菲青霉菌、新型隱球菌等)
注意事項(xiàng):又叫真菌染色液(McManus PAS法),尤其適用于曲菌、白色念珠菌染色。真菌呈紫色,胞核呈藍(lán)色。
儲(chǔ)存條件:4℃,避光,12個(gè)月

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一,McManus在1946年最先使用PAS技術(shù)顯示黏蛋白,該法常用來(lái)顯示糖原和其他多糖,該技術(shù)不僅能顯示糖原,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、真菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。糖類(lèi)及有關(guān)物質(zhì)中的1,2-乙二醇基被氧化為二醛,醛與Schiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物,產(chǎn)生紫紅色。氧化劑還可氧化細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì),使用時(shí)應(yīng)注意選擇好氧化劑濃度和氧化時(shí)間,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過(guò)氧化,這是很關(guān)鍵的步驟。

糖原PAS染色液(真菌專(zhuān)用)利用真菌含有多糖,氧化劑氧化真菌壁上的多糖而暴露出醛基,醛基與無(wú)色Schiff結(jié)合呈現(xiàn)紅色。該染色法性能穩(wěn)定,特異性強(qiáng);操作簡(jiǎn)捷,僅需0.5h;濃度低氧化劑更適用于對(duì)真菌染色,無(wú)鹽酸乙醇分化液分化步驟。

操作步驟(僅供參考):
1、常規(guī)固定(常采用10%福爾馬林),常規(guī)脫水包埋。
2、細(xì)胞涂片入蒸餾水(無(wú)需包埋、脫蠟)或組織切片脫蠟入蒸餾水。
3、入氧化劑室溫氧化10min。
4、自來(lái)水沖洗2次,蒸餾水浸洗2次。
5、入SchiffReagent并加蓋,置于室溫陰暗處浸染10~20min。
6、亞硫酸鈉溶液滴洗2次,每次2min。
7、流水沖洗2min。
8、逐級(jí)常規(guī)乙醇脫水。二甲苯透明,中性樹(shù)膠封固。

染色結(jié)果:
真菌    紫紅色
細(xì)胞質(zhì)  深淺不一的紅色
備注:顏色深淺很大程度上取決于樣品在氧化劑和SchiffReagent中作用時(shí)間的長(zhǎng)短。

陰性對(duì)照(可選):
1、取淀粉酶1g溶解于PBS(pH5.3)100ml,處理30~60min,與其他樣本共同入氧化劑。結(jié)果應(yīng)為陰性。
2、(備選方案)取唾液片(過(guò)濾后用)處理30~60min,與其他樣本共同入氧化劑。結(jié)果應(yīng)為陰性。
3、(備選方案)如果對(duì)照片采用其自身樣本,對(duì)照片不經(jīng)氧化劑這一步,直接入SchiffReagent。結(jié)果應(yīng)為陰性。

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