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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司資料大小
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235次中文名稱:植物過氧化物酶(POD)提取試劑
儲存條件:4℃,12個月
產(chǎn)品規(guī)格:500ml
產(chǎn)品用途:植物過氧化物酶(POD)提取液主要用于裂解植物組織,提取植物樣品中的過氧化物酶。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途
產(chǎn)品簡介:過氧化物酶(peroxisome,POD)是以過氧化氫為電子受體催化底物氧化的酶,主要存在于細(xì)胞的過氧化物酶體中,以鐵卟啉為輔基,可催化過氧化氫,氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。該酶屬于細(xì)胞木質(zhì)素合成途徑中間的關(guān)鍵酶,研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機理,為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。
試劑:
(1)0.1%愈創(chuàng)木酚
(2)0.18% H2O2:取30%H2O2 3ml,蒸餾水定量至500ml
(3)標(biāo)準(zhǔn)母液:吸取 5% K2Cr2O7 1.2ml和純化的10%Co(NO3)2 溶液50ml,混合后加蒸餾水稀釋7倍,即為每毫升相當(dāng)于6.75μg四鄰甲氧基苯酚標(biāo)準(zhǔn)母液
方法步驟:
(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:取20ml具塞試管6支,編號,按下表配制四鄰甲氧基苯酚標(biāo)準(zhǔn)系列溶液,混勻后以1號管調(diào)零,于470 nm波長下測定吸光度,以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?;蛴糜嬎闫髑蟪鑫舛龋╕)隨標(biāo)準(zhǔn)液濃度(X)變化的線性回歸方程。
2)POD的提?。喝〈郎y植物樣品(如葉片等),剪碎混勻,稱取0.5?1.0 g于研缽中,加少量 石英砂、CaC03和適量蒸餾水,冰浴研磨勻漿,蒸餾水定至50 mL,搖勻后離心,上清液即為待測酶液。
(3)POD活性測定:取20mL具塞試管6支,3支測定(3個重復(fù)),3支空白對照。各加入酶液1.0 mL,0.1%愈創(chuàng)木酚1.0 mL,蒸餾水6.9 mL,搖勻,加入0.18% H202 1.0 mL(空白管不加,多加1.0mL蒸餾水),搖勻(計時),25℃下準(zhǔn)確反應(yīng)10 min,加5%偏磷酸0.2 mL終止反應(yīng)。用標(biāo)準(zhǔn)曲線1號管調(diào)零,于分光光度計上測定3支測定管和空白對照管的A470。
計算公式
式中,X為測定管四鄰甲氧基苯酚的含量(mg);X0為對照四鄰甲氧基苯酚的含量(μg);Vt為酶液總體積(mL);FW為樣品鮮重(g);Vs為測定時取酶液的量(mL);t為酶作用的時間(min)。
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